外泌體初次于綿羊網織紅細胞中被發現, 1987年Johnstone將其命名為“exosome”。現今,其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。多種細胞在正常及病理狀態下均可分泌外泌體。其主要來源于細胞內內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中 。外泌體富含膽固醇和鞘磷脂。2007年, Valadi等發現鼠的肥大細胞分泌 的 exosome可以被人的肥大細胞捕獲,并且其攜帶的mRNA成分可以進入細胞漿中可以被翻譯成蛋白質,不僅只是mRNA,exosomes所轉移的microRNA同樣具有生物活性,在進入靶細胞后可以靶向調節細胞中mRNA的水平。這一發現使得研究人員對exosome的研究熱情激增,截止已經通過286項研究發現了41860種蛋白質、2838種microRNA、3408種mRNA。靠譜的外泌體檢測服務平臺,南京英瀚斯。青海比較好的外泌體測序
外泌體是指包含了復雜RNA和蛋白質的小膜泡(30-150nm),現今,其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年,外泌體***于綿羊網織紅細胞中被發現,1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細胞在正常及病理狀態下均可分泌外泌體。其主要來源于細胞內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中。所有培養的細胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應功能的精確分子機制剛剛開始研究。外泌體被視為特異性分泌的膜泡,參與細胞間通訊,對外泌體的研究興趣日益增長,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創診斷的開發。青海比較好的外泌體提取南京外泌體檢測服務,優先南京英瀚斯。
外泌存在于人類的生殖,妊娠和胚胎發育需要精細/動態的細胞間通信。**、羊水、血液和母乳都含有具有假定功能的外泌體。精漿外泌體與精子成熟有關。分子譜顯示,microRNAslet-7a,let-7b,miR-148a,miR-375和miR-99a富集于來自多個人類捐贈者的精漿來源外泌體中,這些miRNA與白細胞介素(IL-10和IL-13)的表達有關,提高了外泌體在生殖道常駐免疫中發揮作用的可能性。精漿來源的外泌體也能抑制HIV-1***,可能是通過阻斷HIV早期蛋白轉錄***劑(Tat)的招募和HIV-1的后續轉錄。
外泌體在1980年初次被發現后,其被認為是細胞排泄廢物的一種方式,如今隨著大量對其生物來源、其物質構成及運輸、細胞間信號的傳導以及在體液中的分布的研究發現外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型,其可參與到機體免疫應答、抗原提呈、細胞遷移、細胞分化、**侵襲等方方面面。有研究表明**來源的外泌體參與到腫瘤細胞與基底細胞的遺傳信息的交換,從而導致大量新生血管的生成,促進了**的生長與侵襲。外泌體(Exosomes)鑒定+外泌體示蹤方法 南京英瀚斯生物。
外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法,這是外泌體提取比較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,電鏡鑒定時發現外泌體聚集成塊,由于微泡和外泌體沒有非常統一的鑒定標準,也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心,這種操作簡單、省時,不影響外泌體的生物活性,但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高,但是前期準備工作繁雜,耗時,量少。四是免疫磁珠法,這種方法可以保證外泌體形態的完整,特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設備,但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性,不便進行下一步的實驗。五是PS親和法,該方法將PS(磷脂酰絲氨酸)與磁珠結合,利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似,獲得的外泌體形態完整,純度比較高。由于不使用變性劑,不影響外泌體的生物活性,外泌體可用于細胞共培養和體內注射。2016.9《ScientificReports》雜志發表了該方法比較新數據,表明PS法可提取相當高純度的外泌體外泌體研究整體解決方案_英瀚斯生物。青海比較好的外泌體提取
外泌體的產生過程,南京英瀚斯生物。青海比較好的外泌體測序
外泌分離后可以做蛋白,也可以做RNA(microRNA和LncRNA),36%的研究人員通過Westernblot或其他方法來鑒定蛋白,29%的人員利用qPCR對microRNA表達譜進行分析,9%利用芯片進行microRNA表達譜分析。同時,新一代測序的用戶也不少,13%的人員利用NGS開展microRNA/小RNA研究,9% 開展mRNA研究。此外,目前的大部分工作還是停留在科研階段,后續的生物標志物開發和驗證不多,而診斷和療法的開發就更少。Razvi認為,exosome的定性和定量研究是個快速發展的市場。同時,循環生物標志物的市場也存在著機遇和挑戰。不過,無創產前檢測技術的成功讓人們相信,循環生物標志物有望在**及其他疾病的診斷上發揮作用。青海比較好的外泌體測序