緩沖溶液的作用原理是通過互為酸堿緩沖對之間的酸堿平衡移動來抵御外加少量酸、堿以及稀釋作用的。緩沖溶液自身pH值可根據(jù)公式進行計算,緩沖溶液的緩沖能力可以用緩沖容量進行標度。但是,任何緩沖溶液的緩沖能力都是有限的,因為當大量的H+或OH-進入溶液時,緩沖溶液中的緩沖對將被大量消耗,抗堿、抗酸的作用也隨之減弱直到消失。實際應用中各緩沖對組成的緩沖溶液都有比較好的緩沖范圍。在實際生產(chǎn)過程中,如果選擇的緩沖溶液緩沖范圍與預期偏差較大,使用大量強酸/強堿或許可以強行將溶液pH調(diào)至預期值,但此時溶液體系的緩沖容量已消耗殆盡,無法起到應有的緩沖保護效果,對制劑產(chǎn)品后續(xù)的加工及長期儲存穩(wěn)定性造成影響。注射級,低內(nèi)***、國產(chǎn)化穩(wěn)定供應、高性價比注射級HEPES。山西供注射用HEPES醫(yī)院采購
注射級HEPES使用方法有兩種:(1)HEPES可按所需的濃度直接加入到配制的培養(yǎng)液中,再過濾除菌。每1000ml培養(yǎng)液中加入2.38克HEPES,待溶后用lNNaOH調(diào)pH至7.2,濾過除菌后使用。此時HEPES的使用濃度為10mmol/L。(2)亦可配成100x貯存液(lmol/L),使用前取99ml培養(yǎng)液加入lml貯存液,**終應用濃度仍為10mmol/L。lmol/L(100x)HEPES貯存液配制方法:取23.8gHEPES溶于90ml雙蒸水中,用lNNaOH調(diào)pH至7.5一8.0,然后用水定容至100ml,過濾除菌,分裝小瓶(2ml/瓶),4℃或-20℃保存。需要注意的是,HEPES緩沖液的使用終濃度為10-50mmol/L,對細胞無毒性作用。一般情況下,濃度為20mmol/L的HEPES即可達到緩沖能力。現(xiàn)在市售HEPES為約10g包裝的小瓶,大家根據(jù)實際情況正確靈活配制就OK了山西供注射用HEPES醫(yī)院采購AVT穩(wěn)定供應注射級海藻糖、蔗糖、TRIS/TRIS-HCl、HEPES等生物保護劑與緩沖鹽。
酸堿緩沖溶液是指能夠抵抗外加少量強酸、強堿以及水的稀釋作用,并維持溶液pH值基本不變的溶液。常見的緩沖溶液需具備酸堿緩沖對,緩沖對可以是兩種不同的物質(zhì),如HAc-NaAc緩沖溶液中的HAc和NaAc,也可以是一種物質(zhì)里同時含有互為共軛酸堿的不同基團,如鄰苯二甲酸氫鉀中的羧基(-COOH)和羧酸根(-COO-)。當然,濃度很大的強酸、強堿溶液中即使不含有酸堿緩沖對也有一定的緩沖能力,因為外加少量的酸或堿對強酸、強堿的濃度變化影響很小,所以pH值基本不變。
外源基因?qū)胝婧思毎姆椒ㄓ泻芏喾N,如磷酸鈣轉(zhuǎn)染法、DEAE-葡聚糖轉(zhuǎn)染法、脂質(zhì)體法、電穿孔法、顯微注射法等。2×HEPES緩沖鹽溶液主要用于磷酸鈣轉(zhuǎn)染,其主要成分為HEPES,HEPES是一種非離子兩性緩沖劑,能有效控制pH在范圍,尤其在pH具有較好的緩沖能力,終濃度一般為mmol/L,培養(yǎng)液內(nèi)含mmol/LHEPES 即可達到較好的緩沖能力。Leagene HEPES緩沖鹽溶液(2×HeBS)是一種常用的細胞轉(zhuǎn)染溶液,主要由HEPES、氯化鈉、磷酸鹽等組成,其**適pH值為,經(jīng)過濾除菌處理。影響磷酸鈣轉(zhuǎn)染效率的因素主要有沉淀中DNA含量、DNA 在細胞上停留的時間、休克時間。Leagene 2xHeBS要求DNA濃度在為宜,Hela、BALB等細胞沉淀放置,CHO、DUKX、BⅡ等細胞可以通過甘油、DMSO進行熱休克處理以提高轉(zhuǎn)染效率。艾偉拓注射用HEPES已登記。
儲存方法:HEPES緩沖液在2-8℃下可保存1年。注意事項:HEPES緩沖液運輸時需要加冰袋。但儲存時避免冷凍,否則會有鹽類物質(zhì)析出。N-三(羥甲基)甲基甘氨酸Tricine,CAS是5704-04-1,是一種兩性離子緩沖液,名字由Tris和glycine衍生而來,結(jié)構類似于Tris,但是高濃度具有比Tris更弱的抑制性,也是“Good”緩沖液之一,**初開發(fā)用于提供葉綠體反應的緩沖體系。Tricine的有效pH緩沖范圍為7.4-8.8,pKa=8.1(25℃),常用做電泳緩沖液,以及用來重懸細胞沉淀。Tricine具有低負電荷和高離子強度的特性,非常適用于電泳分離1~100kDa的低分子量蛋白。基于螢火蟲熒光素酶的ATP分析實驗中,比較10種常見的緩沖液,Tricine(25mM)表現(xiàn)出比較好的檢測效果。另外,在自由基誘導的膜損傷實驗中,Tricine還是一種有效的羥自由基清除劑。作者:泰安格林化工鏈接:國內(nèi)AVT注射用HEPES已登記。山西供注射用HEPES醫(yī)院采購
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HEPES緩沖溶液具有對細胞無毒性、不易穿過生物膜、不參與細胞內(nèi)生化過程等特點,所以在生化實驗中具有***的應用,如可用于開放式細胞生長、細胞的長期觀察、RNA或DNA提取試劑盒中。其次,相關研究表明以HEPES溶液做緩沖液有利于多肽在金納米粒子表面的偶聯(lián)反應。另外,HEPES緩沖溶液對鎂生物降解影響的相關實驗表明,HEPES能提高鎂的生物降解性以及抑制鎂不溶鹽層的形成。具體應用方面,如鹽酸伊立替康脂質(zhì)體注射液(Onivyde)。2022年4月15日,施維雅公司(SERVIER)宣布,其胰腺****藥物易安達(通用名:鹽酸伊立替康脂質(zhì)體注射液)獲得中國國家藥品監(jiān)督管理局(NMPA)正式批準,與5-氟尿嘧啶(5-FU)和亞葉酸(LV)聯(lián)合用于***接受吉西他濱***后進展的轉(zhuǎn)移性胰腺*患者。伊立替康脂質(zhì)體注射液作為一款轉(zhuǎn)移性胰腺****藥物,早前已在全球多個國家和地區(qū)獲批。更多信息詳見《易安達(鹽酸伊立替康脂質(zhì)體注射液)正式獲批!制劑***,發(fā)展歷程及市場前景深度分析》山西供注射用HEPES醫(yī)院采購
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