在體光纖成像記錄對于成像結果的處理,需要依賴專業的圖像分析軟件,分割出目的信號和背景噪聲,獲得準確的熒光強度值。光學成像方法可分為基于熒光的方法和基于生物發光的方法。光學相對于設備小且較便宜。活的物體顯微成像的缺點是它的有創性,因為需要通過手術創造一個窗口來觀察感興趣的結構和組織。宏觀層析熒光成像可以無創、定量和三維方式測定熒光,但其空間分辨率比活的物體顯微鏡低(約1毫米)。光學成像的根本缺點是光的組織穿透率低。由于吸收和散射,熒光發射的可見光譜中的光只能穿透幾百微米的組織。這個問題限制了大多數光學方法在小動物或人類表面結構研究中的應用。使用近紅外光譜能夠提高信號的組織穿透能力,并能降低了組織的自體熒光。在體光纖成像記錄有望代替傳統熒光探針。鈣熒光指示蛋白病毒成像光纖方案
在體光纖成像記錄系統在成像速度和分辨率方面還存很多不足。在成像系統的傳輸矩陣測試階段,必須采用SLM 實現相位調制,而SLM 器件的響應速度比較低,幀率只能達到幾百赫茲,一些特殊的器件可以達到20 kHz,但對于像素為100pixel×100pixel的成像區域進行逐點成像,成像速率只能達到2 frame/s,在實際應用中有很大的局限性。SLM 器件的光效率較低,體積較大,不利于系統集成和結構微型化。單光纖成像系統需要預先測定光纖的傳輸特性(即光纖傳輸矩陣),而傳輸矩陣會受光纖形態(如彎曲、壓力和溫度)的影響。如果光纖在使用過程中受到外界的擾動,那么傳輸矩陣會發生變化,對成像產生較大影響。鈣熒光指示蛋白病毒成像光纖方案將使科學家能夠控制在體光纖成像記錄。
在體生物發光成像不需要外部光源激發, 自發熒光少,而在體光纖成像記錄,需要特定波長的外部激發光源激發, 自發熒光較多, 故前者比后者靈敏度更高, 在體生物發光斷層成像原型系統, 主要由 CCD相機、 固定小動物的支架、 控制裝置 (使支架水平運動、 垂直運動或旋轉) 、完全密閉的不透光的成像暗箱等組成。將小動物麻醉后固定在支架上, 并置于成像暗箱中, 由控制裝置帶動支架沿水平方向運動、 垂直方向運動或旋轉, 利用相機從多個不同角度和位置對活的物體小動物的生物發光現象進行投影成像 然后將采集到的數據信息傳輸到計算機中, 并采用特定的圖像重建算法定位動物體內的發光光源, 得到活的物體動物體內發光光源的精確位置信息。
小動物在體光纖成像記錄可根據實驗需要通過尾靜脈注射、皮下移植、原位移植等方法接種已標記的細胞或組織。在建模時應認真考慮實驗目的和選擇熒光標記,如標記熒光波長短,則穿透效率不高,建模時不宜接種深部臟器和觀察體內轉移,但可以觀察皮下瘤和解剖后臟器直接成像。深部臟器和體內轉移的觀察大多選用熒光素酶標記。小鼠經過常規麻醉(氣麻、針麻皆可)后放入成像暗箱平臺,軟件控制平臺的升降到一個合適的視野,自動開啟照明燈(明場)拍攝首先一次背景圖。下一步,自動關閉照明燈,在沒有外界光源的條件下(暗場)拍攝由小鼠體內發出的特異光子。明場與暗場的背景圖疊加后可以直觀的顯示動物體內特異光子的部位和強度,完成成像操作。值得注意的是熒光成像應選擇合適的激發和發射濾片,生物發光則需要成像前體內注射底物激發發光。在體光纖成像記錄集成信號采集與數字同步模塊。
在體光纖成像記錄應用:1、在體光纖成像記錄通過光學記錄特定細胞類型在自然狀態下的神經活動;2、實時觀測動物在進行復雜行為時的神經投射活動;3、闡明特殊的神經環路在動物行為中的作用;4、通過直接觀測和投射相關的神經環路的動態活動模式,整機一體化,輕巧便攜,集成信號采集與數字同步模塊;通道數:默認采樣通道數7路,可根據實驗需求訂制擴展;通過熒光信號強度變化可以很好的表征神經元的活性,并實時監測記錄熒光信號強度的方法即光纖記錄。在體光纖成像記錄的工作原理是將光源入射的光束經由光纖送入調制器。鈣熒光指示蛋白病毒成像光纖方案
在體光纖成像記錄用于對細胞內部的各個細胞器進行染色。鈣熒光指示蛋白病毒成像光纖方案
在體光纖成像記錄分辨率和對比度是成像質量的重要組成部分,分辨率指成像系統所能重現的被測物體細節的數量,對比度則是成像系統所產生的被測物體與其背景之間的灰度差別。攝像頭、鏡頭和燈光是決定分辨率和對比度的重要因素。成像系統所需較小像素分辨率可由下式計算:較小分辨率=(物件較長端長度/較小特征尺寸)×2以條形碼為例,假如較長端長度為60mm,較小特征尺寸是0.2mm,那么根據上式可算出其較小分辨率應該是(60/0.2)×2=600鏡頭焦距是分辨率另一種表現形式。鈣熒光指示蛋白病毒成像光纖方案
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