固體斜面培養基配制:培養基的過濾澄清,液體培養基必須一定澄清,瓊脂培養基也應透明無明顯沉淀,因此,須要采用過濾或其它澄清方法以達到此項要求。一般液體培養基可用濾紙過濾法,濾紙應折疊成折扇或漏斗形,以避免因液壓不均勻而引起濾紙破裂。瓊脂培養基可用清潔的白色薄絨布趁熱過濾。亦可用中間夾有薄層吸水棉的雙層紗布過濾。新制肉、肝、血和土豆等浸液時、則須先用絨布將碎渣濾去,再用濾紙反復過濾。如過濾法不能達到澄清要求、則須用蛋清澄清法。即將冷卻至55~60°C的培養基放入大的三角燒瓶內,裝入量不得超過燒瓶容量的1/2,每1000ml培養基加入1~2個雞蛋的蛋白,強力振搖3~5分鐘,置高壓蒸汽滅菌器中、121°C加熱20分鐘、取出趁熱以絨布過濾即可。培養基的分裝,培養基的分裝,應按使用的目的和要求,分裝于試管、燒瓶等適當容器內。分裝量不得超過容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵,其外還須用防水紙包扎(現試管一般多有用螺旋蓋者)。分裝時較好能使用半自動或電動的定量分裝器。培養基制備器使用注射器將添加劑加入,確保了添加劑的無菌添加。北京培養基滅菌 培養基制備器
培養基的實驗室制備:正確制備培養基時微生物檢驗的較基礎步驟之一。使用脫水培養基和其他成分,尤其是含有有毒物質(如膽鹽或其他選擇劑)的成分時,應遵守良好實驗室規范和生產廠商提供的使用說明。培養基的不正確制備會導致培養基出現質量問題。使用商品化脫水合成培養基制備培養基時,應嚴格按照廠商提供的使用說明配置。記錄所有相關數據,如質量/體積、pH、制備日期、滅菌條件和制備人員等。使用各別成分制備培養基時,應按照配方準確配制,記錄所有細節信息,如;培養基名稱和類型及試劑級別、每個成分物質含量、制造商、批號、pH、培養基體積(分裝體積)、無菌措施(包括實施的方式、溫度及時間)、配置日期、人員等,以便潮源。北京培養基滅菌 培養基制備器培養基是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養料。
在制備培養基時,通常要考慮以下因素:1.緩沖能力碳算鹽緩沖系統由于毒性小、成本低、對培養物有營養作用,因此比其他緩沖系統用得多。在pH值條件下的緩沖能力差。2.滲透壓多數培養細胞對滲透壓有很寬的耐受范圍,一般常用冰點降低或蒸汽壓升高測定。如果自己配培養基,可通過測定滲透壓防止3.粘度培養基的粘度主要受血清含量的影響,在多數情況下,對細胞生長沒有什么影響。在攪拌條件下,用羧甲基纖維素增加培養基的粘度,可減輕細胞損害。這對在低血清濃度或無血清下條件下培養細胞顯得尤為重要。
什么是細胞培養:細胞培養是指從動物或植物中提取細胞,然后在人工環境中進行培養以進行科學研究。較早的細胞培養技術是在100多年前開發的,為科學的巨大突破做出了貢獻。如今,它已成為全世界實驗室用于研究細胞的生理學、生物化學、疾病潛在機制以及藥物和有毒化合物的作用的基本工具。它也可用于在藥物篩選和大規模制造生物化合物,諸如疫苗和治病性蛋白質。貯存:培養基在30℃下放置1天,無污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放于2-8℃冰箱中備用。培養基制備器必須附有該批培養基制備記錄副頁或明顯標簽。
培養基的實驗室制備:1.水:除特定要求,實驗室用水的電導率在25℃下應不高于25uS/cm(相當于電阻率≥0.4MΩcm)。微生物污染應不超過103CFU/mL,較好低于102CFU/mL。應根GB/T5750.12或其他有效方法,定期檢驗微生物的污染。2.稱量和復水:稱量所需量的脫水培養基(注意防止吸入粉末,尤其是含有有害物質的培養基粉末),先加入少量水,充分混合(注意避免培養基結塊)后再加水至所需的量。3.溶解和分裝:脫水培養基加水后適當加熱,并不攪拌使其快速溶解,必要時,重新溶解。含瓊脂的培養基在加熱溶解前應浸泡幾分鐘。培養基制備器應存放于冷暗處,較好能放于普通冰箱內。北京培養基滅菌 培養基制備器
培養酵母菌一般用麥芽汁培養基,培養霉菌則一般用查氏合成培養基。北京培養基滅菌 培養基制備器
培養基制備的九個步驟關注要點:步驟一:稱取數量:用1/100的電子天平稱出培養基所需的藥物。首先參照配方計算出配制相應培養基需要各成分的數量,然后用電子天平準確稱取重量。步驟二:培養基溶化:將培養基納入燒杯容器中,加小適量的水,緩慢加水并用玻璃棒小幅度攪拌。倘若培養基中不含瓊脂,則不需要對培養基加熱;相反含有瓊脂,就需要用本生燈/電磁爐加熱煮沸。步驟三:調培養基pH:雖然培養基中含有緩沖物質,可以盡量使培養基的pH值保持在標準范圍內,但如果配制的培養基不能要求,則必須進行必要的調整。如果您有校準過的pH計,則可以使用pH計。步驟四:培養基過濾:如果對配制的培養基沒有特殊要求,這一步可以省略。步驟五:培養基分裝:準備好的培養基根據用途不同分為燒瓶、試管等容器,分裝試管量大采用自動分液器,分裝試管量小,可以用漏斗分液。確定這批培養基的較終pH值。步驟六:培養基滅菌處理:分裝完成的培養基應馬上滅菌。北京培養基滅菌 培養基制備器