細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,細(xì)胞培養(yǎng)基是不可或缺的,細(xì)胞培養(yǎng)基既是培養(yǎng)細(xì)胞中供給細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞生殖增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),也是培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境。通常細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí)需要加入血清,以維持細(xì)胞的生長(zhǎng)和存活。而除了血清之外,部分細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中需要添加胰島素和β-巰基乙醇(β-mercaptoethanol)等成分來(lái)維持細(xì)胞狀態(tài)。MCF-7和NIH:OVCAR-3等細(xì)胞需要額外添加胰島素,而Thp-1和MC3T3-E1 subclone 14等細(xì)胞則需要添加β-巰基乙醇,不同細(xì)胞加入量會(huì)有差異,需根據(jù)細(xì)胞類型判斷。某些培養(yǎng)基會(huì)在特定環(huán)境下產(chǎn)生特定的表型變化,例如MacConkey培養(yǎng)基生成紅色菌落表示腸道桿菌的存在。硝酸鹽肉湯
天然培養(yǎng)基:天然培養(yǎng)基是指一類利用動(dòng)物、植物或微生物體包括其提取物制成的培養(yǎng)基。例如。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、麥芽汁培養(yǎng)基和LB培養(yǎng)基等。常用的天然有機(jī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括豆芽汁、玉米粉、土壤浸液、麩皮、牛奶、血清、椰子汁等。天然培養(yǎng)基成本較低,除在實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常使用外,也適于用來(lái)進(jìn)行工業(yè)上大規(guī)模的微生物發(fā)酵生產(chǎn)。組合培養(yǎng)基:合成培養(yǎng)基是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分,用化學(xué)物質(zhì)模擬合成、人工設(shè)計(jì)而配制的培養(yǎng)基。例如,高氏1號(hào)培養(yǎng)基和查氏培養(yǎng)基等。合成培養(yǎng)基有一定的配方,配制合成培養(yǎng)基時(shí)重復(fù)性強(qiáng),但與天然培養(yǎng)基相比其成本較高,微生物在其中生長(zhǎng)速度較慢,一般適于在實(shí)驗(yàn)室用來(lái)進(jìn)行有關(guān)微生物營(yíng)養(yǎng)需求、代謝、分類鑒定、生物量測(cè)定、菌種選育及遺傳分析等方面的研究工作。硝酸鹽肉湯LB培養(yǎng)基是普遍使用的通用培養(yǎng)基,適用于大多數(shù)腸道菌和非腸道菌的培養(yǎng)。
培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度合適時(shí)微生物才能生長(zhǎng)良好,營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度過(guò)低時(shí)不能滿足微生物正常生長(zhǎng)所需,濃度過(guò)高時(shí)則可能對(duì)微生物生長(zhǎng)起抑制作用,例如高濃度糖類物質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽、重金屬離子等不僅不能維持和促進(jìn)微生物的生長(zhǎng),反而起到抑菌或殺菌作用。另外,培養(yǎng)基中各營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)之間的濃度配比也直接影響微生物的生長(zhǎng)繁殖和(或)代謝產(chǎn)物的形成和積累,其中碳氮比(C/N)的影響較大。嚴(yán)格地講,碳氮比指培養(yǎng)基中碳元素與氮元素的物質(zhì)的量比值,有時(shí)也指培養(yǎng)基中還原糖與粗蛋白之比。例如,在利用微生物發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸的過(guò)程中,培養(yǎng)基碳氮比為4/1時(shí),菌體大量繁殖,谷氨酸積累少;當(dāng)培養(yǎng)基碳氮比為3/1時(shí),菌體繁殖受到抑制,谷氨酸產(chǎn)量則大量增加。
什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅?酚紅在培養(yǎng)基中用作pH值的指示劑:中性時(shí)為紅色,酸性時(shí)為黃色,堿性時(shí)為紫色。酚紅本身對(duì)生物制品質(zhì)量并不會(huì)產(chǎn)生影響,可以通過(guò)純化技術(shù)去除,但酚紅在無(wú)血清培養(yǎng)基可能帶來(lái)胞內(nèi)鈉/鉀失衡,影響細(xì)胞生長(zhǎng),當(dāng)然這種作用能被血清所中和或減輕。酚紅并不是培養(yǎng)基中必需的一種成分,很多國(guó)外的疫苗或抗體生產(chǎn)企業(yè)在生產(chǎn)過(guò)程中都使用無(wú)酚紅培養(yǎng)基。研究表明,酚紅可以模擬固醇類的作用。為避免固醇類反應(yīng),培養(yǎng)細(xì)胞,尤其是哺乳類細(xì)胞時(shí),用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測(cè),一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測(cè)時(shí),不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基的傳遞需要在制備和使用期間保持良好的無(wú)菌技術(shù),避免細(xì)菌交叉污染。
氨基酸是細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的基本成分,氨基酸中有12種是細(xì)胞本身不合成的,必須由培養(yǎng)液提供。水解乳蛋白、膠原是另外兩種較好的天然培養(yǎng)基成分。水解乳蛋白是乳白蛋白的水解產(chǎn)物,呈蛋黃色粉末狀,富含氨基酸。一般配制成0.5%溶液,微酸性。膠原是從動(dòng)物真皮中提取的,具改善細(xì)胞表面特性促使其附著生長(zhǎng)的作用。特殊培養(yǎng)基:包括厭氧培養(yǎng)基和細(xì)菌L型培養(yǎng)基等。前者是培養(yǎng)專性厭氧菌的培養(yǎng)基,除含營(yíng)養(yǎng)成分外,還加入還原劑以降低培養(yǎng)基的氧化還原電勢(shì),如皰肉培養(yǎng)基、巰基乙醇酸鈉培養(yǎng)基等。后者是針對(duì)細(xì)胞壁缺損的細(xì)菌L型,由于胞內(nèi)滲透壓較高,故培養(yǎng)基必須采用高滲低瓊脂培養(yǎng)基。常用的培養(yǎng)基中添加的基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括碳源、氮源、磷酸鹽、有機(jī)物、無(wú)機(jī)鹽和微量元素。硝酸鹽肉湯
孟德?tīng)?韋伯利法可以計(jì)算培養(yǎng)基的可利用能量。硝酸鹽肉湯
總體而言,所有微生物生長(zhǎng)繁殖均需要培養(yǎng)基含有碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子、水及能源,但由于微生物營(yíng)養(yǎng)類型復(fù)雜,不同微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求是不一樣的,因此首先要根據(jù)不同微生物的營(yíng)養(yǎng)需求配制針對(duì)性強(qiáng)的培養(yǎng)基。自養(yǎng)型微生物能從簡(jiǎn)單的無(wú)機(jī)物合成自身需要的糖類、脂類、蛋白質(zhì)、核酸、維生素等復(fù)雜的有機(jī)物,因此培養(yǎng)自養(yǎng)型微生物的培養(yǎng)基完全可以(或應(yīng)該)由簡(jiǎn)單的無(wú)機(jī)物組成。例如,培養(yǎng)化能自養(yǎng)型的氧化硫硫桿菌(Thiobacillus thiooxdans)的培養(yǎng)基組成見(jiàn)表3.9。在該培養(yǎng)基配制過(guò)程中并未專門加入其他碳源物質(zhì),而是依靠空氣中和溶于水中的CO2為氧化硫硫桿菌提供碳源。硝酸鹽肉湯
上海瑞楚生物科技有限公司是以培養(yǎng)基,菌種,標(biāo)準(zhǔn)品,酶研發(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務(wù)為一體的從事生物科技、農(nóng)業(yè)科技、環(huán)保科技領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開(kāi)發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)服務(wù),化工原料及產(chǎn)品(除危險(xiǎn)化學(xué)品、監(jiān)控化學(xué)品、煙花爆竹、民用baozha物品、易制毒化學(xué)品),日用百貨,金屬制品,塑料制品,儀器儀表,實(shí)驗(yàn)室設(shè)備(除醫(yī)療器械)銷售,會(huì)務(wù)服務(wù),從事貨物及技術(shù)的進(jìn)出口業(yè)務(wù)等。企業(yè),公司成立于2012-11-29,地址在寶安公路4997號(hào)2號(hào)樓5樓。至創(chuàng)始至今,公司已經(jīng)頗有規(guī)模。公司主要經(jīng)營(yíng)培養(yǎng)基,菌種,標(biāo)準(zhǔn)品,酶等,我們始終堅(jiān)持以可靠的產(chǎn)品質(zhì)量,良好的服務(wù)理念,優(yōu)惠的服務(wù)價(jià)格誠(chéng)信和讓利于客戶,堅(jiān)持用自己的服務(wù)去打動(dòng)客戶。瑞楚生物致力于開(kāi)拓國(guó)內(nèi)市場(chǎng),與化工行業(yè)內(nèi)企業(yè)建立長(zhǎng)期穩(wěn)定的伙伴關(guān)系,公司以產(chǎn)品質(zhì)量及良好的售后服務(wù),獲得客戶及業(yè)內(nèi)的一致好評(píng)。上海瑞楚生物科技有限公司以先進(jìn)工藝為基礎(chǔ)、以產(chǎn)品質(zhì)量為根本、以技術(shù)創(chuàng)新為動(dòng)力,開(kāi)發(fā)并推出多項(xiàng)具有競(jìng)爭(zhēng)力的培養(yǎng)基,菌種,標(biāo)準(zhǔn)品,酶產(chǎn)品,確保了在培養(yǎng)基,菌種,標(biāo)準(zhǔn)品,酶市場(chǎng)的優(yōu)勢(shì)。