確保Cre重組酶只作用于特定細胞，主要通過以下幾種方式實現：1.**組織特異性啟動子**：-利用組織特異性啟動子控制Cre重組酶的表達，可以確保Cre酶只在特定組織或細胞中表達。這種方法通過將Cre基因置于特定細胞類型特有的啟動子控制之下，實現對Cre酶表達的精確控制。2.**誘導型Cre重組酶系統**：-通過使用Cre-ERT（雌素受體突變體與Cre重組酶的融合蛋白），可以實現對Cre活性的時間控制。在無他莫昔芬誘導時，Cre-ERT與熱激蛋白Hsp90結合，定位于細胞質中；當他莫昔芬給藥誘導時，Hsp90脫離Cre-ERT，使Cre-ERT進入細胞核發揮基因重組的作用。這種系統相當于為Cre-Lox系統加裝了一個由他莫昔芬控制的外源開關，使得體內基因編輯更具時空靈活性。3.**藥物誘導的Cre系統**：-例如Tet-on系統，通過四環素或其衍生物多西環素的添加來激起基因表達。在三重轉基因動物中，rtTA在特定啟動子的控制下表達，多西環素與rtTA結合，Cre的表達，導致固定的報告基因重組。4.**AAV遞送Cre**：-利用包含組織特異性啟動子的腺相關病毒（AAV）載體可以選擇性地將Cre重組酶遞送至特定細胞。

Cpf1是一種新發現的類2/型V CRISPR-Cas DNA內切酶，在不同系統中顯示出一系列的活性。Recombinant Human cTnT

嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶I（BstDNAPolymeraseI）和它的大片段（LargeFragment）是兩種在分子生物學實驗中常用的酶。它們的主要區別在于結構和活性：1.**結構**：-完整的BstDNAPolymeraseI包含一個5'→3'的核酸外切酶活性區域，而大片段是通過基因工程改造或蛋白酶處理去掉了這個外切酶活性區域的酶。因此，大片段沒有5'→3'的核酸外切酶活性，但保留了5'→3'的DNA聚合酶活性。2.**活性**：-BstDNAPolymeraseI具有5'→3'的核酸外切酶活性，這意味著它在合成DNA的同時可以“校對”錯誤，切除不匹配的核苷酸。而大片段由于缺少外切酶活性區域，不具有這種校對能力。-大片段具有更強的鏈置換能力，這使得它非常適合于等溫擴增反應，如環介導的等溫擴增（LAMP）和滾環擴增（RCA）。3.**應用**：-BstDNAPolymeraseI由于具有校對功能，可能更適合于需要高保真度的DNA合成反應。-BstDNAPolymerase,LargeFragment由于其鏈置換能力，更適合于等溫擴增技術，這些技術不需要熱循環儀，可以在恒定溫度下進行DNA擴增。4.**熱穩定性**：-BstDNAPolymerase,LargeFragment通常在65°C左右的溫度下進行反應，而BstDNAPolymeraseI可能具有更寬的反應溫度范圍。Recombinant Biotinylated Human RGMa Protein,His-Avi Tag在一項研究中，比較了具有不同NLS融合的Cas9蛋白和Cas9 mRNA在斑馬魚基因組編輯中的效率。

BstDNAPolymerase,LargeFragment（嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶大片段）是一種常用于分子生物學實驗的酶，特別是在等溫DNA擴增技術中。以下是一些關于BstDNAPolymerase,LargeFragment的關鍵信息：1.**來源**：這種酶來源于嗜熱脂肪芽孢桿菌（Bacillusstearothermophilus），是一種熱穩定的DNA聚合酶。2.**活性**：BstDNAPolymerase,LargeFragment具有5'到3'的DNA聚合酶活性，并且具有鏈置換活性，這使得它能夠用于等溫擴增反應，如環介導等溫擴增（LAMP）。3.**熱穩定性**：由于其嗜熱特性，BstDNAPolymerase,LargeFragment能夠在較高的溫度下保持活性，通常在60-65°C。4.**應用**：-**等溫擴增**：用于LAMP和其他等溫擴增技術，這些技術不需要傳統的熱循環儀。-**全基因組擴增**：用于快速擴增少量DNA樣本，以進行進一步的分析。-**突變檢測**：在某些情況下，用于檢測特定基因的突變。5.**優點**：-**高保真度**：與某些其他DNA聚合酶相比，BstDNAPolymerase,LargeFragment具有較高的保真度。-**快速擴增**：等溫擴增技術可以在短時間內快速產生大量DNA。

BstDNA聚合酶在等溫擴增中的優勢主要包括以下幾點：1.**高靈敏度和擴增效率**：BstDNA聚合酶具有鏈置換能力，能夠在恒溫條件下快速、高效、特異性地擴增模板。翌圣生物的BstPlusDNAPolymerase靈敏度超高，低至5copies目的基因可測，且始終能比競品更快達到閾值，擴增速率更快。2.**高dUTP耐受性**：BstPlusDNAPolymerase具有較高的dUTP耐受性，在反應體系中添加dUTP對BstPlusDNAPolymerase的靈敏度及擴增效率無影響，這使得它在防污染系統中表現出色。3.**快速擴增**：使用BstDNA聚合酶的等溫擴增技術，如LAMP，可以在15-60分鐘內實現109-1010倍的擴增，顯示出快速的擴增能力。4.**熱穩定性**：BstDNA聚合酶具有較強的熱穩定性，能在60-65℃的恒溫條件下保持活性，這使得它非常適合于不需要溫度循環的等溫擴增技術。5.**簡化的反應設置**：Bst3.0DNAPolymerase優化了Loop-MediatedIsothermalDNAAmplification(LAMP)反應，簡化了反應設置，可以實現單酶RT-LAMP反應。6.**抗抑制劑能力強**：Bst3.0DNAPolymerase即使在高濃度的擴增抑制劑中，包括dUTP，也能展現出強大的性能。

ExoIII（ExonucleaseIII）和Lambda核酸外切酶（λExonuclease）在DNA末端處理上的主要不同點如下：1.**作用方向**：-**ExoIII**：具有3'→5'外切脫氧核糖核酸酶活性，它從DNA鏈的3'-OH末端逐步切去單核苷酸。-**Lambda核酸外切酶**：是一種5'→3'核酸外切酶，能選擇性地沿5'→3'方向消化5'端磷酸化的雙鏈DNA。2.**底物特異性**：-**ExoIII**：適底物是平末端或5'末端突出的DNA，但也可以作用于雙鏈DNA切刻位點產生單鏈缺口。由于對單鏈DNA無活性，因此難以切割3'突出末端。-**Lambda核酸外切酶**：適底物是5'磷酸化的雙鏈DNA，對單鏈DNA和5'端未磷酸化修飾的DNA的酶切活性較低，不能從DNA的切刻或缺口處起始消化。3.**活性差異**：-**ExoIII**：對具有3'-突出末端(至少有4個堿基，且具有3'-末端C殘基)的DNA、單鏈DNA、硫代磷酸酯連接的核苷酸無活性。-**Lambda核酸外切酶**：對5'-OH端的切割速度比5'-P端慢約20倍；對單鏈DNA的酶切速度比雙鏈DNA慢約100倍。4.**應用場景**：-**ExoIII**：可以用于生產特定方向的單鏈DNA，將線性化DNA設計成為一端為不切割末端（3'突出端），另一端則設計為易切割末端（平端或5'突出端）。

T4 DNA 聚合酶相對不耐熱，在 70℃加熱 10 分鐘可使 T4 DNA 聚合酶失活，因此在實驗操作過程中需要注意溫度。Recombinant Human cTnT

質粒DNA提取后的儲存條件對于保持其活性至關重要。以下是一些推薦的儲存方法：1.**干燥保存**：質粒DNA以干粉狀態保存是比較好的方法。如果總DNA以溶液形式保存，可以使用1×TE緩沖液稀釋，且TE緩沖液的pH值應為8.0-8.5之間。2.**低溫保存**：植物總DNA低溫保存比較好在-80℃以下或液氮保存。如果沒有條件，也可以在-20℃保存。總DNA應避免經常凍融，同時建議每份樣品保存3-5個樣本。總DNA提取后保存的時限通常較組織要長（＞兩年），但若長期保存，每隔兩年應抽測，對不符合使用要求的DNA進行更新。3.**避免反復凍融**：反復凍融會破壞DNA的完整性和活性，因此應盡量避免。4.**使用保護劑**：化學添加劑如二甲基亞砜(DMSO)可以防止DNA單鏈斷裂，但因其毒性和使用量的問題，并不是理想的保護劑。5.**封裝技術**：通過封裝技術保存DNA，可以隔絕外界水、氧氣和光等可能影響DNA穩定的因素。例如，DNAshell®技術基于密封的不銹鋼微型膠囊，在惰性氣氛下，給予DNA干粉保護。6.**使用穩定劑**：一些天然的雙糖，如海藻糖，被認為是一種多功能的保護劑，可以保護生物體免受冷凍、加熱等不利條件的影響。Recombinant Human cTnT