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來源: 發布時間:2024年12月03日

調節樣本的含水量等因素來優化裂解條件·裂解不充分:增加物理破碎的時間和次數。·檢查洗滌液中是否加入乙醇。·洗脫不充分:建議二次洗脫增加產量或提高洗脫體積。問題3:提取的DNA無法擴增怎么辦?解決思路:· 檢測DNA的濃度:過量的DNA模板也會抑制PCR反應。·樣本DNA稀釋之后可以擴增:樣本中的腐殖酸等抑制物含量高。·確定PCR反應條件是否已優化:退火溫度,時間,引物等等。·非特異條帶:洗脫液中目的DNA的豐度可能比較低上海益啟生物的聯系電話。寶山區土壤DNA提取聯系電話

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所述pH緩沖劑為Tris-HCl、Tris-醋酸、NaH2PO4-Na2HPO4、KH2PO4-K2HPO4、醋酸-醋酸鈉、檸檬酸-檸檬酸鈉,所述pH緩沖劑的pH值為7.0-11,推薦的pH緩沖劑為Tris-HCl,推薦的pH緩沖劑的pH值為7.5-8.5; (b)結合液,其組成成分包括表面活性劑、離液鹽、pH緩沖劑; 所述表面活性劑為:聚乙二醇辛基苯基醚、TWEEN 20、TWEEN 40、TWEEN 60、TWEEN 80、NP 40中的一種或兩種及以上的混合,所述表面活性劑的質量濃度為1-100g/L; 所述離液鹽為異硫氰酸胍、鹽酸胍、硫氰酸鉀、高氯酸鈉、碘化鉀、碘化鈉中的一種或兩種及以上的混合,所述離液鹽的濃度為3-5 mol/L; 所述pH緩沖劑為Tris-HCl、Tris-醋酸、NaH2PO4-Na2HPO4、KH2PO4-K2HPO4、醋酸-醋酸鈉、檸檬酸-檸檬酸鈉,所述pH緩沖劑的pH值為4.5-7.0;

加入500 ul漂洗液,混勻,上磁力架吸附1分鐘,吸棄上清;70℃加熱3分鐘;加入20 ul洗脫液,震蕩混勻,70℃加熱3分鐘;上磁力架吸附1分鐘,上清DNA溶液轉移至新的離心管中。 2)PCR擴增及電泳 PCR擴增使用Identifiler Plus試劑盒,10 μl擴增體系中含4 μl master mix、2 μl primer set、4 μl模板,擴增程序為,95℃,11分鐘;94℃,20 秒,59℃,3分鐘,30個循環;60℃,10分鐘;4℃保存;電泳在ABI 3500XL儀器中進行;電泳上樣體系為,1 μl PCR產物,9 μl甲酰胺,其中已加Liz。 以上所述*為本發明的具體實施方式而已,并不用于限制本發明,對于本領域的技術人員來說,本發明可以有各種更改和變化;凡在本發明的精神和原則之內所作的任何修改、等同替換、改進等,均應包含在本發明的保護范圍之內。高質量的土壤DNA提取,保證您的實驗結果。

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