通過EndoS糖苷內(nèi)切酶S進(jìn)行糖蛋白的糖鏈結(jié)構(gòu)分析通常涉及以下步驟:1.**樣本準(zhǔn)備**:首先,需要獲得糖蛋白的純化樣本,以確保分析的準(zhǔn)確性。2.**酶的準(zhǔn)備**:準(zhǔn)備適量的EndoS糖苷內(nèi)切酶S,根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇合適的濃度和緩沖體系。3.**酶切反應(yīng)**:-將糖蛋白樣本與EndoS酶混合,在適宜的條件下(如pH、溫度等)進(jìn)行酶切反應(yīng)。-反應(yīng)時(shí)間根據(jù)EndoS的活性和所需的切割程度來確定。4.**終止反應(yīng)**:在達(dá)到預(yù)期的酶切時(shí)間后,通過加熱或添加適當(dāng)?shù)木彌_液來終止酶切反應(yīng)。5.**分離純化**:-使用色譜技術(shù)(如凝膠滲透色譜、離子交換色譜等)將酶切后的糖蛋白和釋放的糖鏈分離。-純化過程可能需要多步色譜以確保糖鏈的純度。6.**糖鏈分析**:-對分離得到的糖鏈進(jìn)行進(jìn)一步的結(jié)構(gòu)分析,可能包括質(zhì)譜分析、核磁共振(NMR)波譜分析等。-可以使用高分辨率的質(zhì)譜技術(shù),如MALDI-TOF或ESI-MS,來確定糖鏈的精確質(zhì)量。7.**序列鑒定**:通過與已知糖鏈數(shù)據(jù)庫比對,確定糖鏈的序列和結(jié)構(gòu)。8.**功能分析**:研究酶切后的糖蛋白和釋放的糖鏈對生物活性的影響,如結(jié)合特性、免疫原性等。9.**數(shù)據(jù)分析**:收集所有數(shù)據(jù)并進(jìn)行綜合分析,以揭示糖鏈結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。
11A型肺炎多糖鼠單抗是針對肺炎鏈球菌11A型多糖的單克隆抗體,具有以下特點(diǎn):1.**特異性**:鼠單抗具有高度的特異性,能夠識(shí)別并結(jié)合到11A型肺炎鏈球菌的多糖抗原。2.**制備方法**:通過將肺炎多糖與乙肝表面蛋白的偶聯(lián)物作為抗原免疫小鼠,然后從小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合,篩選出能夠表達(dá)特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞株。3.**應(yīng)用**:11A型肺炎多糖鼠單抗可用于定量檢測33F型肺炎多糖或乙肝表面蛋白,其制備的腹水型單抗對不同批次的樣本回收率為95%~105%。4.**疫苗開發(fā)**:在肺炎鏈球菌疫苗的研發(fā)中,多糖蛋白結(jié)合疫苗是當(dāng)前的趨勢,通過將多糖與蛋白偶聯(lián),可以提供更高效價(jià)的抗體水平和免疫記憶。5.**免疫反應(yīng)**:11A型肺炎多糖鼠單抗能夠誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生針對肺炎多糖的血清抗體,這有助于研究肺炎鏈球菌的免疫機(jī)制。6.**疾病預(yù)防**:肺炎鏈球菌是引起肺炎、腦膜炎和敗血癥等嚴(yán)重疾病的主要病原體,11A型肺炎多糖鼠單抗的研究有助于開發(fā)更有效的疫苗,預(yù)防相關(guān)疾病。7.**研究進(jìn)展**:已有研究報(bào)道了使用半合成寡糖結(jié)合疫苗候選物,能夠激發(fā)對肺炎鏈球菌3型的保護(hù)性免疫反應(yīng)。
重組增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(RecombinantEnhancedGreenFluorescentProtein,EGFP)是一種用于生物科學(xué)研究的工具。以下是重組EGFP的一些特點(diǎn)和應(yīng)用:1.**高熒光強(qiáng)度**:EGFP比野生型GFP具有更強(qiáng)的熒光,這使得它在成像和檢測時(shí)更為敏感和有效。2.**改進(jìn)的折疊效率**:EGFP在生理溫度(如37℃)下的折疊效率更高,這有助于在細(xì)胞內(nèi)快速形成成熟的熒光蛋白。3.**單一激發(fā)峰**:與野生型GFP相比,EGFP具有單一的激發(fā)峰,這簡化了成像條件的設(shè)置,并提高了信號(hào)的穩(wěn)定性。4.**適合多種生物系統(tǒng)**:EGFP可以用于多種生物系統(tǒng),包括細(xì)菌、酵母、植物和哺乳動(dòng)物細(xì)胞。5.**多功能性**:EGFP可以作為報(bào)告基因用于基因表達(dá)分析,也可以作為融合標(biāo)簽用于蛋白質(zhì)定位和動(dòng)態(tài)研究。6.**非糖基化**:在大腸桿菌中表達(dá)的重組EGFP是非糖基化的,這有助于減少翻譯后修飾的復(fù)雜性。7.**純度高**:重組EGFP通常具有高純度,適合用于各種生物化學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。8.**穩(wěn)定性**:EGFP的熒光穩(wěn)定性好,適合長時(shí)間觀察和成像。9.**分子量**:重組EGFP的分子量約為26.9kDa,由239個(gè)氨基酸構(gòu)成。
為確保大腸桿菌表達(dá)的重組抑肽酶的純度和活性,需要考慮以下幾個(gè)關(guān)鍵步驟:1.**高質(zhì)量的細(xì)胞培養(yǎng)**:在GMP法規(guī)下生產(chǎn),確保無動(dòng)物源成分,從而避免動(dòng)物源性的病毒污染。2.**蛋白純化技術(shù)**:通過多次柱純化過程來獲得高純度的重組抑肽酶,通常純度達(dá)到≥95%(HPLC)。3.**活性測定**:使用標(biāo)準(zhǔn)化的生物活性測定方法來確保每毫克蛋白質(zhì)的活性單位(EPU),通常≥3.0EPU/mgpro。4.**質(zhì)量控制**:通過高效液相色譜(HPLC)等技術(shù)進(jìn)行質(zhì)量控制,確保蛋白含量和純度符合標(biāo)準(zhǔn)。5.**穩(wěn)定性和儲(chǔ)存條件**:凍干粉在2~8℃條件下保存,有效期為2年,確保了長期穩(wěn)定性。6.**使用建議**:提供明確的使用方法,包括推薦的結(jié)合pH值和溶解介質(zhì),例如使用0.9%NaCl溶解,并建議在pH<3.0條件下不結(jié)合,以保證活性。7.**法規(guī)符合性**:生產(chǎn)設(shè)備和環(huán)境符合相關(guān)法規(guī)要求,遵循NSFISO9001:2015質(zhì)量體系,并符合GMP指導(dǎo)原則,確保產(chǎn)品質(zhì)量和安全性。通過這些步驟,可以確保重組抑肽酶的純度和活性,從而在科研和生物技術(shù)應(yīng)用中發(fā)揮其作用。將Cas9/sgRNA復(fù)合物轉(zhuǎn)染到目標(biāo)細(xì)胞中。可以使用脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染、電穿孔或其他轉(zhuǎn)染技術(shù) 。
N末端His標(biāo)簽的泛素蛋白(RecombinantHumanUbiquitinProteinTagged-HisTag,UB)是一種經(jīng)過遺傳工程改造,在其N末端融合了His標(biāo)簽的泛素蛋白。以下是這種蛋白的一些特點(diǎn):1.**His標(biāo)簽**:N末端His標(biāo)簽是一種常見的融合標(biāo)簽,用于提高蛋白質(zhì)的可溶性和便于通過親和層析進(jìn)行純化。His標(biāo)簽通常由6到10個(gè)組氨酸(His)組成。2.**重組表達(dá)**:這種泛素蛋白通常在大腸桿菌(E.coli)或其他宿主細(xì)胞中通過重組DNA技術(shù)表達(dá)。3.**高度保守**:泛素蛋白是一個(gè)76個(gè)氨基酸殘基的多肽,在真核生物中高度保守。4.**分子量**:由于N末端添加了His標(biāo)簽,重組泛素蛋白的分子量會(huì)略大于天然泛素(約8.5kDa)。5.**純度**:重組泛素蛋白通常具有高純度(>95%bySDS-PAGE),適合用于各種生物化學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。6.**溶解性**:His標(biāo)簽的添加可以提高蛋白質(zhì)在水溶液中的溶解性,便于實(shí)驗(yàn)操作。7.**穩(wěn)定性**:凍干粉形式的重組泛素蛋白在-25~-15℃保存,具有較長的有效期,通常為一年。8.**應(yīng)用廣**:N末端His標(biāo)簽的泛素蛋白可用于多種實(shí)驗(yàn),包括蛋白質(zhì)泛素化、E3泛素連接酶活性測定、蛋白質(zhì)相互作用研究等。來源于Francisella tularensis:FnCas12a是一種來源于Francisella tularensis菌株的核酸內(nèi)切酶。Recombinant Mouse Adiponectin/Acrp30 Protein,hFc Tag
牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I是一種來源于牛痘病毒的酶,有多種作用于DNA分子的能力。Recombinant Cynomolgus TROP-2/TACSTD2 Protein,His Tag
pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是一種經(jīng)過特殊改造的融合蛋白,由ProteinA和高活性的Tn5轉(zhuǎn)座酶組成,具有以下主要應(yīng)用:1.**高通量測序建庫**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶可以用于快速構(gòu)建用于高通量測序的DNA文庫,通過其轉(zhuǎn)座酶活性實(shí)現(xiàn)DNA片段化,同時(shí)加上測序接頭,簡化了傳統(tǒng)DNA測序建庫的多步過程。2.**CUT&Tag技術(shù)**:這是一種新興的蛋白質(zhì)與DNA相互作用研究方法,pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶利用ProteinA與特定抗體結(jié)合,將轉(zhuǎn)座酶帶到目標(biāo)蛋白附近進(jìn)行DNA切割和標(biāo)簽添加,實(shí)現(xiàn)對蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)的高通量測序分析。CUT&Tag技術(shù)具有高特異性、低背景噪音、高靈敏度、良好重復(fù)性等優(yōu)點(diǎn),適用于表觀遺傳學(xué)、干細(xì)胞等領(lǐng)域的研究。3.**ATAC-seq**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶也可用于ATAC-seq實(shí)驗(yàn),這是一種研究染色質(zhì)可及性的方法,通過轉(zhuǎn)座酶在沒有核酸酶消化的情況下切割染色質(zhì)DNA,然后在切割位點(diǎn)加上測序接頭,進(jìn)行后續(xù)的測序分析。4.**轉(zhuǎn)錄組測序快速建庫**:有研究開發(fā)了基于Tn5轉(zhuǎn)座酶的轉(zhuǎn)錄組測序快速建庫方法,例如SHERRY方法,它利用Tn5轉(zhuǎn)座酶直接作用于RNA/DNA雜交鏈,簡化了建庫過程,適用于單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序,提高了樣本的利用率和測序速度。
Recombinant Human E-Selectin/CD62E Protein
Recombinant Biotinylated Human SEZ6 Protein
PTD-p65-P1 Peptide
Recombinant Human Angiostatin
Recombinant Human SPARC(BM-40)
Recombinant Human SLPI Protein
C-telopeptide
Recombinant Biotinylated Human MADCAM1 Protein
Recombinant Human PSGL-1 Protein
Recombinant Mouse LIX/CXCL5