確保N末端His標簽的泛素蛋白在實驗中的活性和穩定性,需要考慮以下幾個關鍵因素:1.**儲存條件**:按照生產商的建議,將重組泛素蛋白凍干粉儲存在-25~-15℃的條件下,以保持其穩定性和活性。2.**避免反復凍融**:多次凍融會降低蛋白質的穩定性和活性。建議在使用后將剩余的蛋白質分裝并儲存在推薦的條件下。3.**復溶條件**:按照產品說明,使用無菌蒸餾水或推薦的緩沖液將蛋白質復溶至適當的濃度。通常建議添加0.1%BSA以增加蛋白質的溶解度和穩定性。4.**使用前離心**:在使用前,將蛋白質溶液短暫離心,以確保所有組分都沉積在底部,避免取樣時的不均勻性。5.**工作濃度和體積**:根據實驗設計,將蛋白質稀釋至工作濃度,并盡量使用小體積以減少蛋白質的降解。6.**避免蛋白降解**:在實驗過程中,使用蛋白酶抑制劑以防止蛋白降解酶對重組泛素蛋白的降解。7.**避免氧化**:在蛋白質的儲存和使用過程中,避免氧化,可以通過添加抗氧化劑如DTT或TCEP。8.**避免污染**:使用無菌技術操作,確保實驗器材和環境的清潔,避免微生物污染。9.**操作環境**:在4℃或冰上進行操作,以減少蛋白質降解和非特異性相互作用。在gRNA的引導下,Cas9 NLS可以對特定DNA序列進行剪切,適用于研究基因功能或進行基因編輯 。Recombinant Mouse CALCA/CGRP Protein,hFc Tag
IdeSProtease的分子改造技術主要通過以下幾個方面提高其穩定性和比活性:1.**定向進化**:利用定向進化方法,通過多輪的突變和篩選,獲得具有改善特性的酶變體。定向進化不依賴于大規模突變文庫的構建,而是通過定點突變操作,顯著提高酶分子的穩定性。2.**半理性設計與理性設計**:結合半理性設計和理性設計的方法,通過計算模擬和結構分析,對酶的三維結構進行優化,以提高其在各種環境條件下的穩定性。3.**糖基化修飾**:作為一種新的酶分子穩定性改造技術,糖基化可以提高酶的穩定性,防止酶在逆境中的失活,從而提高其在實際應用中的催化活性。4.**消除蛋白質中的不穩定性弱點**:通過分析蛋白質結構中的穩定性弱點,進行定點突變,以增強蛋白質的整體穩定性。5.**提高比活性**:通過分子改造,提高IdeSProtease的比活性,使其在更低的濃度下就能有效地催化反應,從而提高整體的催化效率。6.**增加底物特異性**:改造后的IdeSProtease除了可以切割人IgG1~4、猴、羊、兔IgG外,還對小鼠IgG2a、IgG3具有特異性切割活性。。
Benzonase核酸酶殘留檢測試劑盒通過以下方式實現高靈敏性:1.**熒光探針技術**:試劑盒采用熒光標記的DNA探針,這種探針在沒有Benzonase核酸酶的樣品中穩定存在且不產生熒光信號。當樣品中含有核酸酶殘留時,核酸酶會切割熒光標記的DNA探針,導致熒光信號的增強。這種變化可以用來定量分析Benzonase的殘留量,實現高靈敏度檢測。2.**熒光共振能量轉移(FRET)**:該技術利用了供體(Donor)和受體(Acceptor)熒光基團間的相互作用。在未切割狀態下,供體的熒光被受體淬滅,而一旦DNA探針被Benzonase切割,供體熒光基團與受體分離,熒光信號增強,從而實現高靈敏度的檢測。3.**優化的底物探針**:試劑盒中的Benzonase底物是一種合成的DNA寡核苷酸探針,其一端具有VIC熒光基團,另一端具有BHQ1淬滅基團。這種設計使得在底物被切割后,VIC熒光不再被BHQ1淬滅,從而可以非常靈敏地檢測到Benzonase核酸酶活性。4.**高靈敏度的檢測范圍**:試劑盒能夠檢測到低達約0.002U(約0.003ng)的Benzonase或BeyoZonase,樣品中的Benzonase濃度約為0.0002U/μl或0.3pg/μl,這遠低于常規同類產品的檢測限。
磁珠法質粒小量抽提試劑盒通過一系列優化的步驟來確保從細菌細胞中提取高質量和高純度的質粒DNA。以下是這一過程的一般步驟:1.**細胞培養**:-首先,將含有質粒的大腸桿菌在適宜的培養基中培養至適宜密度(通常是OD600約0.6-1.2)。2.**裂解細胞**:-使用試劑盒提供的裂解液(含有SDS和可能的其他裂解成分)破壞細菌細胞壁和膜,釋放出細胞內容物。3.**吸附磁珠**:-將磁珠加入裂解后的混合物中,磁珠表面修飾有能夠特異性結合核酸的配體,使得質粒DNA吸附于磁珠表面。4.**磁分離**:-利用磁力架將吸附有質粒DNA的磁珠從溶液中分離出來,去除未結合的蛋白質和其他細胞碎片。5.**洗滌雜質**:-經過幾次洗滌步驟,使用試劑盒提供的洗滌液去除吸附在磁珠表面的蛋白質、RNA和其他雜質。6.**去除洗滌液**:-磁分離后,小心地移除洗滌液,避免磁珠干燥或吸入磁珠,以確保純度。7.**洗脫質粒**:-使用試劑盒提供的洗脫液(通常是低鹽或高pH的緩沖液)將質粒DNA從磁珠上洗脫下來。8.**收集質粒**:-洗脫后的質粒DNA通常在室溫或4°C下保存,避免多次凍融,以維持DNA的完整性。
EndoS,即糖苷內切酶S(Endo-S),是一種具有高度特異性的酶,它在生物化學研究中有著重要應用,尤其是在糖蛋白和抗體藥物偶聯物(ADCs)的研究中。以下是EndoS的一些關鍵特點:1.**特異性**:EndoS能夠特異性地識別并切割N-連接糖鏈的殼二糖結構,即在N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)和天冬酰胺之間的連接處進行切割。2.**應用**:在制備糖鏈定點ADC化合物中,EndoS被用于將小分子細胞毒藥物“一步”定點連接到抗體糖基化位點,提供了一種重要的技術方法。3.**兼容性**:EndoS對多樣化的LacNAc修飾顯示出良好的兼容性,可以接受不同生物正交基團、熒光基團等衍生物作為底物,實現抗體糖基化修飾。4.**活性**:EndoS的活性對多肽沒有嚴格的要求,可以接受蛋白質、肽、天門冬酰胺或游離聚糖作為底物。但是,對于具有三、四個支鏈的唾液酸化及去唾液酸化的聚糖,EndoS沒有活性。5.**產品形式**:EndoS通常以帶有His標簽的形式存在,便于從反應中去除,這在實驗操作中提供了便利。6.**研究進展**:EndoS在去糖基化方法研究中是一個重要的工具,特別是在研究糖蛋白的多肽部分和多糖部分的結構和功能時。
Cas9 NLS可用于體外實驗中篩選能夠高效引導Cas9蛋白進行DNA剪切的gRNA序列 。Recombinant Mouse CALCA/CGRP Protein,hFc Tag
在蛋白質糖基化分析中,除了N-糖苷酶F(PNGaseF),還有其他幾種酶也發揮著重要作用,具有各自的優勢:1.**EndoH糖苷內切酶H**:這種酶可以水解高甘露糖型N-連接糖鏈,通常用于區分高甘露糖型和復雜型糖鏈。2.**EndoS糖苷內切酶S**:EndoS能夠從IgG重鏈的殼二糖結構之間切除N-連接糖,有助于分析抗體的糖基化模式。3.**FastPNGaseF**:這是一種經過優化的PNGaseF,能在數分鐘內對抗體、免疫球蛋白、融合蛋白以及其他糖蛋白進行徹底和快速的去糖基化,簡化了實驗流程,同時保持了靈敏度和重復性。4.**O-糖苷酶O-glycosidase**:用于去除O-連接的糖鏈,這對于O-糖基化蛋白質的分析至關重要。5.**三氟甲基磺酸(TFMS)法**:這是一種化學去糖基化方法,可以用于釋放糖鏈,尤其在某些難以使用酶法去除糖鏈的情況下。6.**質譜法**:雖然不是酶,但質譜法是分析糖鏈結構的強大工具,可以結合酶法或化學法釋放的糖鏈進行詳細分析。7.**核磁共振法(NMR)**:NMR技術可以確定糖鏈的構型、連接位置、分支和微觀多樣性,是糖鏈立體化學結構分析的重要方法。這些酶和方法各有優勢,可以根據實驗的具體需求和糖基化類型的不同進行選擇,以獲得比較好的分析結果。
Recombinant Biotinylated Mouse APLN Protein
Recombinant Mouse DR6/TNFRSF21 Protein
Recombinant Human E-Selectin/CD62E Protein
Recombinant Biotinylated Human SEZ6 Protein
PTD-p65-P1 Peptide
Recombinant Human Angiostatin
Recombinant Human SPARC(BM-40)
Recombinant Human SLPI Protein
C-telopeptide
Recombinant Biotinylated Human MADCAM1 Protein