RNA提取試劑的選擇:首先,要確定材料的可用性。盡管現(xiàn)有的RNA提取試劑都用壓制RNase的成分,但提取的材料仍需謹(jǐn)慎處理。提取的材料的新鮮度是獲取完整RNA的關(guān)鍵,但是由于種種原因無法立即從新鮮材料中提取RNA時(shí),使用Takara公司的樣品保護(hù)劑SampleProtectorforRNA/DNA可以免去使用液氮或超低溫冰箱的不便,同時(shí)也可以有效解決組織、細(xì)胞樣品的短時(shí)間保存及運(yùn)輸問題。此外,如果將不同時(shí)期收集的樣品都預(yù)先存放于本試劑中,可以做到立即終止并固定RNA表達(dá)的時(shí)序變化,減少實(shí)驗(yàn)組間的誤差RNA提取試劑注意事項(xiàng):盡量不要對(duì)著RNA樣品說話,以防RNA酶污染。正規(guī)RNA提取試劑廠家
超快速多糖多酚植物RNA提取試劑盒專門針對(duì)多糖,多酚等難提的植物RNA樣本提取設(shè)計(jì),適用于棉花,甘薯,番茄,板栗,龍眼,荔枝,葡萄,番茄,龍眼,芒果,草莓,百合,獼猴桃,香蕉,梨,甘蔗,海棠,蘋果,石斛,銀杏,小麥,羊角吊蘭,水稻,玉米牡丹,月季,紅豆杉,馬鈴薯,白松松針,山藥,木瓜,吊蘭葉片RNA提,水仙花、青花菜、地被菊、梅花、石斛、毛桃、海棠、黑加侖、擬南芥、虎、大豆、草莓、冬青、月季、薔薇、沙棘、冬棗、蘆薈、仙人掌、報(bào)春花、唐菖蒲、櫻桃、白玉蘭、毛白楊、櫻花、百合花、紫菜、綠藻苧麻、榛子冬青樹,虎仗,黑加侖,黃瓜等農(nóng)作物,果實(shí),花卉,蔬菜等多糖多酚,色素等次級(jí)代謝物嚴(yán)重的植物樣本RNA提取。正規(guī)RNA提取試劑廠家RNA由核糖核苷酸經(jīng)磷酸二酯鍵縮合而成長(zhǎng)鏈狀分子。
細(xì)胞外RNA(exRNA)已成為研究界的新寵。近年來,人們?cè)谘獫{或血清樣本中成功檢測(cè)到疾病相關(guān)的exRNA,使其有望成為非侵入性的生物標(biāo)志物。然而,從血漿或血清中分離exRNA仍頗具挑戰(zhàn)性,這一方面是因?yàn)閑xRNA豐度低,另一方面是因?yàn)檠褐械奈廴疚飼?huì)壓制PCR。商品化的試劑盒能簡(jiǎn)化和加速exRNA提取過程,已成為循環(huán)exRNA研究不可缺少的工具。然而,這些試劑盒的提取效率如何,是否能去除血漿中的污染物,是否會(huì)偏向特定的RNA,都沒有經(jīng)過評(píng)估,而這類評(píng)估對(duì)于結(jié)果解釋和實(shí)驗(yàn)之間的比較都很關(guān)鍵。
RNA穩(wěn)定方法:1.在裂解緩沖液中立即溶解,使RNase失活。然后樣品可以立即處理或冷凍保存。2.浸泡在穩(wěn)定試劑中(如DNA/RNAShield),使核酸酶失活,并在環(huán)境溫度下長(zhǎng)時(shí)間保護(hù)核酸。這對(duì)正在實(shí)地收集樣本或處理珍貴的病人樣本(例如組織活檢、全血等)的研究人員特別有幫助。確保樣品完全溶解:在RNA提取過程中,較大限度地提高RNA產(chǎn)量和質(zhì)量的較佳方法是保證樣品的完全裂解。然而,并不是所有的樣本都對(duì)相同的裂解方案敏感。例如,血細(xì)胞(如淋巴細(xì)胞、PBMCs等)和微生物細(xì)胞往往更難以有效地溶解。光光添加基于洗滌劑的裂解緩沖液可能并不總是足夠的。為了提高裂解效果,可以將裂解緩沖液與機(jī)械裂解步驟(研磨珠破碎)匹配,或者在裂解液上游加入酶裂解步驟(如蛋白酶K、溶菌酶等)。快速程序在25-40分鐘內(nèi)提供高質(zhì)量的總RNA。
DNA和RNA的鑒別染色:利用吖啶橙的變色特性可鑒別DNA和RNA。吖啶橙作為一種熒光染料已被用于染色固定,非固定細(xì)胞核酸,或作溶酶體的一種標(biāo)記。觀察死亡細(xì)胞熒光變色性變化以及區(qū)別分裂細(xì)胞和靜止細(xì)胞群體。雖然測(cè)定DNA和RNA含量時(shí)較難獲得好的重復(fù)性結(jié)果,但該方法已被許多實(shí)驗(yàn)室普遍采用。RNA是核糖核酸,DNA是脫氧核酸。區(qū)別:溶解性:都溶于水而不溶于乙醇,因此,常用乙醇來沉淀溶液中的DNA和RNA。DNA溶于苯酚而RNA不溶,故可用苯酚來沉淀RNA。這種情況下,可以在裂解緩沖液中立即進(jìn)行溶解。正規(guī)RNA提取試劑廠家
血漿/血清RNA提取試劑盒:沒有DNA和蛋白質(zhì)的污染,適用于RT-PCR、qRT-PCR、芯片分析。正規(guī)RNA提取試劑廠家
超快速多糖多酚植物RNA提取試劑盒優(yōu)勢(shì):1、快速:多糖多酚植物RNA提取試劑盒提取RNA的整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作步驟簡(jiǎn)化快捷從時(shí)間因素考量上較大限度的防止RNA在提取中的降解(一般樣品十多分鐘就能完一個(gè)樣RNA的提取,較大縮短了一般試劑盒提取所需要的半小時(shí)甚至更長(zhǎng)的時(shí)間)。2、高產(chǎn)量:多糖多酚植物RNA提取試劑盒擁有較強(qiáng)細(xì)胞裂解液,保證后續(xù)RNA提取的得率。(能完全通過化學(xué)方法徹底裂解細(xì)胞讓RNA釋放完整,并且有效成分能壓制內(nèi)源RNA酶的降解作用)。3、高純度:試劑盒的進(jìn)口吸附柱具有的專一吸附特性和強(qiáng)吸附力。三管齊下保證所提取RNA的產(chǎn)量和純度,前期得到的高質(zhì)量RNA才能保證后續(xù)實(shí)驗(yàn)成功,尤其是對(duì)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)等。正規(guī)RNA提取試劑廠家