細胞凍存液的配制可選用10%的DMSO加上90%的小牛血清,可以現用現配。除了這個方式,還可選擇20%的DMSO機上80%的小牛血清,配成兩倍的儲存液,在使用時細胞懸液和凍存液按照1:1的比例混勻使用,特別的方便。凍存液可直接置于-20攝氏度的環境中保存。使用細胞凍存液需要注意以下幾點:1、在使用凍存液前,需要確保細胞凍存液已經完全融化,并要輕輕的混勻。對融化后的細胞凍存液要置于4℃的環境中保存。2、使用凍存液之前應該確保凍存前的細胞生長情況比較良好,比如說細胞需要處于對數生長期,并且凍存的時候存活率大于90%。3、在使用細胞凍存液期間,為了保證可以發揮較佳的效果,建議將細胞凍存在液氮之中,這樣可以長時間的進行保存。如果說將細胞置于-80℃的環境下保存,那么保存的時間大約為1年。4、細胞凍存液如果需要做標記的話,要使用耐受有機溶劑的馬克筆進行標記,以防被酒精或異丙醇等擦掉,不能辨識。在細胞培養中,細胞凍存是較關鍵環節之一。鄭州無血清細胞凍存液廠家
凍存方式:按照凍存保護液在凍結后是否形成冰晶來劃分,凍存方法可分為非玻璃化和玻璃化凍存兩種。非玻璃化凍存是利用各種溫級的冰箱分階段降溫至-70℃~-80℃,然后直接投入液氮進行保存;或者是利用電子計算機程控降溫儀以及利用液氮的氣、液,按一定的降溫速率從室溫降至-100℃以下,再直接投入液氮保存的方法。以該種方法凍結的細胞懸液或多或少都有冰晶的形成。玻璃化凍存則是指利用多種高濃度的冷凍保護劑聯合形成的玻璃化冷凍保護液保護懸浮細胞,直接投入液氮進行凍存的方法。以該中方法凍結的細胞懸液沒有冰晶的形成。但目前細胞凍存較常用的仍是前一種方法。鄭州無血清細胞凍存液廠家細胞保藏中心,用于細胞株的長期保存。
無血清細胞凍存液與含血清細胞凍存液對比:傳統的細胞凍存液是使用培養基、血清和DMSO按照一定的比例混合,其中DMSO的含量是10%,血清的含量是10%,統稱為含血清細胞凍存液。含血清細胞凍存液的一般的凍存方法是梯度降溫凍存法,如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘,然后移至-20℃冰箱30分鐘,再移至-80℃冰箱保存16-18個小時(或隔夜),較后才移至液氮罐中進行長期的儲存。可見,含血清細胞凍存液凍存細胞時遇到的問題:1.凍存細胞時需現配凍存液(如購買市面上通用的含血清細胞凍存液,此步可省略)。2.需要程序降溫(4℃→-20℃→-80℃→液氮),步驟繁瑣,耗時耗力。3.含血清,細胞污染(病毒、霉菌和支原體等)的風險更高。4.血清批次、品質間差異導致凍存液的批次間差異。5.需液氮凍存,且不能原位(如孔板)凍存。
凍存細胞注意事項:凍存細胞系以備將來之用時,必須遵守以下原則。我們建議您嚴格遵守您所用細胞系附帶的操作說明,以便獲得較佳結果。在細胞處于生長期密度達到70-90%的情況下進行培養細胞的凍存,并且細胞傳代盡可能靠前。確保凍存前活細胞百分比至少為90%。請注意較佳凍存條件取決于所用細胞系。細胞應緩慢冷凍,可使用可控制降溫速度的低溫冰箱或者低溫冷凍容器,使溫度每分鐘大約降低1°C。必須使用推薦的凍存培養基。凍存培養基中應含有DMSO或者甘油等冷凍保護劑。無血清細胞凍存液產品特色:成分明確,無批次差異。
細胞凍存是將細胞放在低溫環境,減少細胞代謝,以便長期儲存的一種技術。細胞凍存是細胞保存的主要方法之一,起到了細胞保種的作用。細胞凍存是細胞保存的主要方法之一,利用凍存技術可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來,這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。目前現有技術中,細胞凍存液中的主要成分有10%二甲基亞砜(DMSO)、20%~90%胎牛血清(FBS)、剩余組分為完全培養基。培養基以及FBS可為細胞提供必要的營養物質。DMSO是一種滲透性保護劑,能夠降低細胞冰點,減少冰晶的形成,從而達到降低細胞損傷的保護效果。但FBS屬于動物源性物質,成分比較復雜,在臨床應用上存在潛在的風險,也增加了污染的幾率,并且由于凍存液中含有動物血清,會導致凍存液的成分存在不穩定的因素。無血清細胞凍存液用于其他類型哺乳動物細胞的儲存。上海鄭州無血清細胞凍存液
無血清細胞凍存液的優勢:無需液氮,-80℃冰箱長期凍存。鄭州無血清細胞凍存液廠家
無血清細胞凍存液的優點有哪些呢:很多所使用的傳統的細胞凍存液的成份主要是:新鮮的培養基,其中含有10%的胎牛血清和5-10%的DMSO。凍存的方法:將冷凍管置于4℃條件喜愛10分鐘,接著在-20℃的條件下30分鐘,-80℃的條件下保存16-18個小時(或隔夜保存也可以),較后再液氮的環境中進行長期的儲存。需要注意在-20℃的環境下保存不可超過1個小時,主要用以防止冰晶產生過大,造成細胞大量的死亡。對于無血清的細胞凍存液來說,其所含有的成分是:不含血清,含DMSO、pH調節劑、葡萄糖等各種細胞營養成分等。其中不含有動物來源性的蛋白,所以能夠減少各類的細菌、霉菌、支原體等帶來的污染,而且可以確保凍存細胞的安全。比較通用于各種動物的細胞株。鄭州無血清細胞凍存液廠家