RNA提取醇沉淀不是越多就越好。有些實驗方案會推薦，在異丙醇沉淀后，用乙醇沉淀兩次。實際上，任何提取實驗，都會在純度和得率這一對矛盾中取舍。醇沉淀會將脂溶性雜質去掉，但部分非脂溶性的雜質依然會連同RNA一起被沉淀下來。因此，多整幾次，并不會讓RNA的純度翻倍，反而還會有降低得率的風險。一般情況下，異丙醇和乙醇各沉淀一次即可。但是，倘若預計RNA濃度很低，那就只能放棄純度，在低溫沉淀數小時，以換來較高的得率。圍繞DEPC的玄學。許多實驗方案會推薦使用0.1%DEPC處理RNA相關用水，以滅活RNase。這一點是要肯定的。不過，在使用DEPC的過程中，又充斥著一些玄學。高壓滅菌后的DEPC水，會有一股“香甜”的味道。許多人會以為那是殘留的DEPC而不敢用。實際上，這只是DEPC分解成CO2和乙醇后，產生的一些揮發性酯類副產物。在細胞中，RNA種類繁多。根據結構功能的不同，RNA主要分三類，即tRNA、rRNA，以及mRNA。寧波RNA提取試劑生產廠家

動物細胞RNA提取：1、懸浮細胞：可直接離心后棄掉培養基，用無菌PBS清洗1~2遍后，再用適量PBS懸浮起來，然后再加入裂解液進行裂解。千萬不要完全棄掉液體后，往沉淀細胞里直接加入裂解液，這樣會使外表層的細胞裂解后釋放的組蛋白包裹粘附在沉淀細胞外側，從而限制沉淀內部的細胞與裂解液的接觸，從而導致細胞裂解不徹底，降低RNA得率。2、半貼壁或貼壁不緊的細胞：棄掉培養基后，用PBS洗1~2次，然后直接吸取適量PBS用吸管或者泵吹打培養皿，把細胞吹下來，轉移到無RNA酶的EP管中，加裂解液進行提取。3、貼壁細胞：需要先用胰酶消化，然后收集到無RNA酶的EP管中，離心去其上清，用PBS洗1~2次，去除多余的胰酶，以適量PBS重懸后繼續進行提取步驟。金華RNA提取試劑廠家直銷RNA提取試劑注意事項：所有離心管，泵頭及相關溶液都必須無RNA酶污染。

目前，主流的RNA提取方法有Trizol法、離心柱法和磁珠法。其中，Trizol法與離心柱法相比，提取效果相當，但因其對操作者帶來的毒性，現在越來越被棄用。磁珠法可以針對大批量樣本處理，適合機器自動化提取，但是提取核酸純度低，提取得率低，且使用成本較高。對于拭子RNA含量較低的樣本或比較珍貴的樣本或樣本總數不是很多的實驗室，選擇的拭子RNA提取方法應是離心柱法。近來，隨著基因診斷技術的發展，從口腔拭子、泌尿生殖道拭子、痰液等樣本中進行RNA提取的試劑盒的應用價值越來越大，如tumour早期診斷、遺傳病檢測和病原體傳染核酸檢測等。拭子RNA提取效果在很大程度上取決于采樣質量、試劑盒性能等，特別是試劑盒的性能較大影響了拭子核酸的基因檢測和各種研究的開展。

經典Trizol法并不能獲得總RNA：這個事實可能會刷不少新手甚至老手的三觀，但確有實驗支持：經典Trizol法會選擇性丟失低GC比的miRNA。這一點，源自一則作者自撤稿的故事。V.NarryKim是韓國鼎鼎大名的美女科學家，專做RNA相關的研究，包括miRNA。幾年前她們組發現一個奇怪的“現象”，即貼壁細胞在消化之后，會有一些miRNA的豐度突然降低，看起來好像是被快速“降解”掉了，并據此寫了一篇文章發到MolecularCell上。但很快她們就發現，這個“現象”難以重復：如果用Trizol做實驗，就一定是陽性結果，而用試劑盒提RNA，就重復不出來。難道是號稱能提總RNA的Trizol方案出了問題？確實如此。經進一步實驗后發現，經典的Trizol方案會使得低GC比的miRNA丟失。帶口罩、帽子，屏住呼吸、不說話，帶乳膠手套并要時常更換。

昆蟲RNA柱式提取試劑盒使用方法：將一半的溶液轉移到離心吸附柱中，12000rmp室溫離心半分鐘，棄穿透液。將剩下的一半溶液轉移到同一離心吸附柱中，12000rmp室溫離心半分鐘，棄穿透液。加0.7mL通用洗柱液，室溫12000rmp離心半分鐘，棄穿透液。加0.3mL通用洗柱液，室溫12000rmp離心半分鐘，棄穿透液。此步可以省略。室溫12000rmp離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的乙醇會影響RNA的使用。將離心吸附柱轉移到RNase-free收集管中，加入50～100μLRNA洗脫液，室溫放置1～2分鐘。12000rmp室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。可從全血，哺乳動物細胞，細菌細胞和菌類細胞中分離總RNA。杭州RNA提取試劑價格

很多RNA也需要通過堿基配對原則形成一定的二級結構乃至三級結構來行使生物學功能。寧波RNA提取試劑生產廠家

piRNA。是一類長度約為24-31nt的非編碼小RNA，通過特異性地與PIWI蛋白結合而發揮生物學作用。現已發現其在生殖干細胞分化、胚胎發育、維持基因組完整性、表達遺傳學調控、異染色質的形成和物種的性別決定等方面起著重要作用，此外在壓制轉座子轉錄和基因轉錄后調控中也扮演著重要角色，并且越來越多的研究表明在病癥組織中piRNA的表達不盡相同。lncRNA。長度約為200-100000個核苷酸，可以通過不同的分子生物學機制調控編碼基因的表達，參與疾病相關的信號通路，對疾病的發生、發展及醫治有重要作用。研究發現，lncRNA-DANCR明顯增強肝病細胞的感性特征，促進一些疾病細胞的形成，在體內干擾DANCR的作用可導致一些疾病細胞活力降低，同時阻止一些miRNA的壓制效應，揭發出一個涉及lncRNA、mRNA和miRNA的新一些疾病形成機制。可見，lncRNA對一些疾病方面有重要作用。另外有研究發現lncRNA在宿主抗病菌反應、骨關節炎、囊性纖維化、藥物研發等方面也有重要的臨床應用價值。寧波RNA提取試劑生產廠家