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湖南外泌體熒光標記

來源: 發(fā)布時間:2023年02月23日

外泌體發(fā)現(xiàn)于1986年,是一種直徑約30~100nm的雙層膜囊泡狀結(jié)構小體,可由機體內(nèi)多種細胞如免疫細胞、干細胞、心血管細胞、網(wǎng)織紅細胞、血小板、神經(jīng)細胞和肉瘤細胞等主動分泌產(chǎn)生,普遍分布于外周血、尿液、唾液、乳汁、腹水、羊水等體液中。外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)(如細胞因子、生長因子)以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質(zhì),在體內(nèi)參與細胞通訊、細胞遷移、促血管新生和抗肉瘤免疫等生理過程,與多種疾病的發(fā)生和進程密切相關。由于外泌體的特殊結(jié)構和功能,使得它具有潛在的應用價值,一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標,另一方面也可以作為診療手段,未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床診療。NTA技術已被作為外泌體表征手段之一。湖南外泌體熒光標記

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外泌體的提取、純化和鑒定:每一個外泌體研究者較初都要為外泌體的分離提取而煩惱。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體,并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體。另外利用外泌體自身的物理化學性質(zhì)所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達到分離效果。提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態(tài)學、粒子大小以及標志蛋白等方式實現(xiàn)的。近來的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在比較多生理病理上起著重要的作用,如免疫中抗原呈遞、瘤子的生長與遷移、組織損傷的修復等。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標志物。外泌體具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構,能比較好的保護其包被的物質(zhì),且能靶向特定細胞或組織,因此是一種比較好靶向給藥系統(tǒng)。湖南外泌體熒光標記免疫印跡或蛋白質(zhì)印跡是分析外泌體較常用的方法之一,其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結(jié)合。

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外泌體的生物發(fā)生和鑒定。液體和細胞外成分,如蛋白質(zhì)、脂類、代謝物、小分子和離子,可以通過內(nèi)吞作用和質(zhì)膜內(nèi)陷,與細胞表面蛋白一起進入細胞。由此產(chǎn)生的胞腔側(cè)質(zhì)膜芽的形成表現(xiàn)為質(zhì)膜的外-內(nèi)取向。這一出芽過程導致芽的形成可能與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、跨高爾基網(wǎng)絡(TGN)和線粒體預先形成的早期核內(nèi)體融合。ESEs也可以與ER和TGN融合,這可能解釋了內(nèi)吞物如何到達它們的。因此,一些ESEs可以包含膜和腔的成分,可以表示不同的起源。外泌體表面蛋白包括四聚體蛋白、整合蛋白、免疫調(diào)節(jié)蛋白等。外泌體可以包含不同類型的細胞表面蛋白、細胞內(nèi)蛋白、RNA、DNA、氨基酸和代謝物。

細胞攝取診療性外泌體:從樹突狀細胞、成纖維細胞和間充質(zhì)細胞中分離出的診療性外泌體可對靶細胞產(chǎn)生特定的作用,包括新抗原呈遞、免疫調(diào)節(jié)和藥物有效載荷傳遞。診療性外泌體對靶細胞的影響可能是通過不同的進入或相互作用機制來控制的。完整的外泌體的進入可能包括受體介導的內(nèi)吞作用、網(wǎng)格蛋白包被小凹、脂筏、吞噬作用、小凹和大胞飲作用。外泌體內(nèi)容物的進入或外泌體信號的誘導可能涉及配體受體誘導的細胞內(nèi)信號或融合,從而將外泌體內(nèi)容物沉積到細胞質(zhì)中。近年來,隨著外泌體研究的不斷深入,它的應用已經(jīng)涉及醫(yī)學基礎和免疫領域、寄生蟲領域。外泌體具有抗原提呈、免疫逃逸、誘導正常細胞轉(zhuǎn)化、促進瘤子發(fā)生和轉(zhuǎn)移等作用。

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細胞外囊泡是蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA和脂質(zhì)運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介,根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類,包括外泌體、微泡和凋亡小體。其中,外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,由多種細胞分泌,內(nèi)含有特定的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、細胞因子或遺傳物質(zhì)。來源于不同的組織的外泌體不只具有其特異性蛋白分子,而且還包含其行使功能的關鍵分子。近年來,隨著外泌體研究的不斷深入,它的應用已經(jīng)涉及瘤子診療領域、醫(yī)學基礎和免疫領域、寄生蟲領域;臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng)、內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)等。外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細胞的生物學活性。湖南外泌體熒光標記

外泌體的大小:外泌體的直徑約30-150nm。湖南外泌體熒光標記

酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA):將其中一種針對外泌體表面抗原的抗體固定在微孔板的表面上,將外泌體樣品暴露于含有固定抗體的孔中,由于抗體-抗原相互作用,表達抗原的外泌體將被捕獲固定在板上。將未捕獲的樣品內(nèi)容物洗掉,并使用另一種抗體檢測固定的外泌體。ELISA已用于從尿液、血漿和血清中分離出外泌體,當使用標準液(已知外泌體的量)創(chuàng)建標準曲線時,甚至可以進行定量。但是,此方法需要通過超速離心或超濾對樣品進行預處理。同樣,流場-流分離與紫外線分析儀和光散射檢測器相結(jié)合已被用于分析外泌體的大小和純度。外泌體屬于胞外囊泡類,除了外泌體之外細胞還分泌微泡以及其它的膜囊泡。湖南外泌體熒光標記

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