DMEM 培養基具備多種實用配方,以滿足不同細胞的生長需求。其中,高糖型(葡萄糖濃度 4500mg/L)和低糖型(葡萄糖濃度 1000mg/L)為常見。高糖型 DMEM 培養基猶如為代謝旺盛的細胞量身定制,為其提供充足的能量來源,促使細胞快速生長、增殖,尤其適用于像腫瘤細胞這類生長迅猛、對能量需求高的細胞。而低糖型 DMEM 培養基則更契合代謝較為緩慢的細胞,為它們營造溫和穩定的生長環境,保障細胞正常代謝與功能維持,在細胞培養過程中,科研人員可依據細胞特性靈活選用合適配方。L-谷氨酰胺是細胞培養中所必需的一種營養元素,但其在溶液中不穩定,會自發降解,不含L-谷氨酰胺的培養基。天津昆蟲細胞培養基
培養液的滲透壓是一個非常重要的因素,細胞通常可耐受260mOsm/kg~320mOsm/kg。標準培養液的滲透壓在此范圍內波動。特別注意:向培養液中加入其它物質有可能會明顯改變培養液的滲透壓,特別是溶于強酸或強堿中的物質。向培養液中添加HEPES時需按以下方法調節鈉離子濃度。緩沖系統大多數細胞所需pH在-。但是,細胞培養適pH值隨培養的細胞種類不同而不同。成纖維細胞喜歡較高pH(-),而傳代轉化細胞系則需要偏酸pH(-)。由于多數培養液靠碳酸氫鈉(NaHCO3)與CO2體系進行緩沖,因此,氣相中的CO2濃度應與培養液中碳酸氫鈉濃度相平衡。如果氣相或培養箱空氣中CO2濃度設定在5%,培養液中NaHCO3的加入量為;如果CO2濃度維持在10%,培養液中NaHCO3的加入量為。細胞培養瓶蓋不應擰得太緊,以保證氣體交換。HEPES是一種非離子緩沖液,在pH-范圍內具有較好的緩沖能力,但是非常昂貴,在高濃度時對一些細胞可能有毒。HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉()共用,以抵消因額外加入HEPES引起的滲透壓增加。在這種培養條件下,細胞培養瓶的蓋子應擰緊,以防止培養液中所需的少量碳酸鹽散入空氣中。大多數培養液中含有酚紅作為pH指示劑,酸性培養液呈橙黃色,堿性培養液呈深紅色。陜西細胞培養基源頭廠家M199全稱Medium 199,即培養基199,是Morgan等在1950年設計的,初用于雞胚成纖維細胞的營養研究。
門)冬氨酸、L-脯氨酸、L-絲氨酸和甘氨酸7種NEAA,能降低細胞培養時細胞自身生產非必須氨基酸的副作用,有效促進細胞增殖代謝。葡萄糖可以根據研究需要,隨意調節葡萄糖的濃度,方便快捷。高糖型培養基普遍應用于生長快、粘附性低的細胞、雜交瘤的骨髓瘤細胞、克隆細胞、DNA轉染的轉化細胞、各種原代病毒宿主細胞、單一細胞的培養以及疫苗的生產,例如利用CHO細胞表達EPO和生產乙肝疫苗。低糖培養基更適合代謝作用較慢、依賴性貼壁細胞的培養。HEPES是一種優良的生物緩沖劑,對細胞無毒性作用,添加HEPES的培養基能夠較長時間保持恒定的PH范圍,可以有效的防止培養液PH波動較大對細胞生長產生不利的影響。可用于無CO2培養箱。酚紅在培養基中被用來作為PH值的指示劑,用以持續監測培養液的酸堿度,在低PH值時酚紅使培養液呈黃色,而較高的PH值時使培養液呈紫色,PH值~,**適合細胞培養。但酚紅也有一些缺點,研究表明酚紅可以模擬固醇類***(特別是雌***)的作用,因此在用到雌***敏感的細胞時(如乳腺組織),**好使用不含酚紅的培養基。酚紅會干擾流式細胞分析時候的檢測。此外,一些無血清培養基的配方中若存在酚紅會干擾鈉-鉀平衡。
任意調節葡萄糖的濃度,簡便快捷。高糖型培養基廣泛應用于生長快、粘附性低的細胞、雜交瘤的骨髓瘤細胞、克隆細胞、DNA轉染的轉化細胞、各種原代病毒寄主細胞、單一細胞的培養以及疫苗的生產,例如運用CHO細胞表述EPO和生產乙肝疫苗。低糖培養基更適宜代謝效用較慢、依賴性貼壁細胞的培養。HEPES是一種優良的海洋生物緩沖劑,對細胞無毒性效用,添加HEPES的培養基能夠較長時間維持恒定的PH范圍,可以有效性的以防培養液PH波動較大對細胞生長產生不利于的影響。可用于無CO2培養箱。酚紅在培養基中被用來作為PH值的指示劑,用以持續監測培養液的酸堿度,在低PH值時酚紅使培養液呈黃色,而較高的PH值時使培養液呈紫色,PH值~,**適宜細胞培養。但酚紅也有一些弱點,研究說明酚紅可以模擬固醇類***(特別是雌***)的功用,因此在用到雌***敏感的細胞時(如乳腺組織),**好用到不含酚紅的培養基。酚紅會干擾流式細胞分析時候的檢測。此外,一些無血清培養基的配方中若存在酚紅會干擾鈉-鉀抵消。青霉素-鏈霉素混合液一般而言也被稱做“雙抗”,是體外培養中為防止微生物污染**常用的***,其中,青霉素能夠擾亂細菌細胞壁的合成,對革蘭陽性菌特別有效性。DMEM/F12培養基含有多種微量元素,廣泛應用于多種哺乳類細胞的培養。
細胞培養基的種類按照細胞培養基的發展歷史,細胞培養基大致可分為平衡鹽溶液、天然細胞培養基、合成細胞培養基、無血清細胞培養基、限定化學成分細胞培養基等幾大種類。(balancedsaltsolution,BSS)BSS主要是由無機鹽、葡萄糖組成,它的作用是維持細胞滲透壓平衡,保持pH穩定及提供簡單的營養。其主要用于細胞的漂洗、配制其他試劑等。幾種常用的BSS配方如下(表1-1)。D-Hank's與Hank's的一個主要區別是前者不含有Ca2+和Mg2+,因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因為Ca2+、Mg2+是細胞膜的重要組成成份,參與細胞粘附等功能,使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免細胞結團。此外,Hanks液和Earle液是常用的BSS基礎溶液,前者緩沖能力較弱,適合于密閉培養;后者緩沖能力較強,適合于5%CO2的培養條件。表1-1幾種常用的BSS配方。TNM-FH昆蟲培養基是改進的Grace’s昆蟲培養基,適當補充添加劑后,可用于各種鱗翅類昆蟲細胞的培養。陜西iclean細胞培養基全國發貨
DMEM 由 Eagle 培養基改良而來,氨基酸、維生素濃度高,為細胞生長供能助力 。天津昆蟲細胞培養基
無血清培養基中通常需要添加一些額外的組分,才能幫助細胞貼壁生長,包括以下幾大類物質:1)促貼壁物質:一般為細胞外基質,如纖連蛋白、層粘連蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細胞功能的分化因子,對許多細胞的繁殖和分化,起著重要作用。纖連蛋白主要促進來自中胚層細胞的貼壁與分化,這些細胞包括成纖維細胞、肉瘤細胞、粒細胞、腎上皮細胞、腎上腺皮質細胞、CHO細胞、成肌細胞等。2)促生長因子:針對不同細胞添加不同的生長因子。也是刺激細胞生長、維持細胞功能的重要物質,有些是許多細胞必不可少的,如胰島素。3)酶抑制劑:培養貼壁生長的細胞,需要用胰酶消化傳代,在無血清培養基中需含酶抑制劑,以終止酶的消化作用,達到保護細胞的目的。常用的是大豆胰酶抑制劑。4)結合蛋白和轉運蛋白:常見如轉鐵蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加量比較大,可增加培養基的粘度,保護細胞免受機械損傷。許多旋轉式培養的無血清培養基都含有牛血清白蛋白。5)微量元素:硒是常見的。天津昆蟲細胞培養基
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