殘留的宿主DNA是生產(chǎn)中產(chǎn)生的雜質(zhì)，其存在潛在的致瘤性、傳染性和免疫原性等風(fēng)險(xiǎn)。相關(guān)研究表明，基因的大小普遍在200bp以上，因此大于200bp有可能會(huì)有一定的致病性，而且殘留DNA片段越大，生物制品的風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)越高。因此，各國(guó)監(jiān)管機(jī)構(gòu)對(duì)其提出了嚴(yán)格要求。美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）在《關(guān)于人類基因zhiliao新產(chǎn)品生產(chǎn)指導(dǎo)文件》中明確指出HCD的片段要小于200bp。2022年5月，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局藥品評(píng)審中心（CDE）發(fā)布的《體內(nèi)基因藥物產(chǎn)品藥學(xué)研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》中也明確指出需對(duì)DNA殘留量和殘留片段大小進(jìn)行控制，建議盡量將DNA殘留片段的大小控制在200bp以下。致力于從深海微生物中識(shí)別新的冷適應(yīng)酶，用于分子研究、體外診斷和制藥領(lǐng)域。上海ArcticZymes高鹽核酸酶

基因藥物常用的AAV載體有三種生產(chǎn)方法，分別是三質(zhì)粒瞬轉(zhuǎn)體系、桿狀病毒表達(dá)載體體系和包裝細(xì)胞體系。其中，20多年前開發(fā)的三質(zhì)粒瞬轉(zhuǎn)表達(dá)技術(shù)仍然占據(jù)腺相關(guān)病毒AAV生產(chǎn)的主流地位，其三質(zhì)粒分別是Helper質(zhì)粒（含E2a/b、E4和VARNA基因）、目標(biāo)基因表達(dá)質(zhì)粒及輔助質(zhì)粒（含Cap和Rep基因）。雖然AAV病毒載體的血清型不同，但AAV的生產(chǎn)流程基本一致，主要有質(zhì)粒共轉(zhuǎn)宿主細(xì)胞HEK293、293細(xì)胞生產(chǎn)病毒顆粒、從細(xì)胞培養(yǎng)上清或/及細(xì)胞裂解液中收獲病毒載體、純化/制劑/無(wú)菌過(guò)濾/灌裝等流程。福建高鹽條件高鹽核酸酶70921-202US FDA指南要求：重組生物制品終產(chǎn)品中，核酸雜質(zhì)含量低于10ng/dose。

在生物工藝流程中，需要使用核酸酶去除終產(chǎn)品中的核酸污染，而核酸酶作為外源成份，也需要在生產(chǎn)流程中去除。核酸酶去除工藝包括熱滅活法、酶抑制劑、離子交換和親合層析法等。AAV衣殼亞種之間因表面電荷的差異導(dǎo)致不同的的等電點(diǎn)，——空衣殼pI在6.3左右，包裝了完整基因組DNA后的病毒顆粒pI大致為5.9。而來(lái)自于S.marcescens的全能核酸酶pI 6.85左右，SAN HQ高鹽核酸酶pI 9.6左右。因此，在同樣的條件下，從AAV溶液中去除SAN HQ高鹽核酸酶比去除Benzonase全能核酸酶更容易、更徹底。

ArcticZymes Technologies于2017年推出了SAN HQ高鹽核酸酶及其對(duì)應(yīng)的SAN HQ ELISA kit。該試劑盒原理是采用雙抗夾心法定量檢測(cè)各種生物制品的中間品、半成品和成品中SAN HQ高鹽核酸酶的殘留含量，特異性的anti-SAN作為捕獲抗體偶聯(lián)在96-well plate，生物素Biotin標(biāo)記anti-SAN作為檢測(cè)抗體，鏈霉親和素-HRP偶聯(lián)物起到信號(hào)放大作用，TMB是終反應(yīng)底物。該試劑盒特異識(shí)別SAN HQ高鹽核酸酶，對(duì)其它核酸酶沒(méi)有特異性結(jié)合。它的定量范圍是0.4-25.6ng/ml，檢測(cè)精確度高RSD<=15%，2-8℃條件下保存12個(gè)月。徐州高鹽核酸酶售后服務(wù)哪家好呢，歡迎咨詢上海倍篤生物 。

經(jīng)典的慢病毒載體（LV）的生產(chǎn)工藝如下，——三質(zhì)粒系統(tǒng)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞系，轉(zhuǎn)染24小時(shí)后LV由轉(zhuǎn)染陽(yáng)性細(xì)胞生產(chǎn)并排出到培養(yǎng)上清液中；收獲上清培養(yǎng)液后，加入核酸酶去除HCD污染，通過(guò)澄清步驟去除大的細(xì)胞碎片等雜質(zhì)；下游純化步驟分離LV載體，純化方法包括切向流過(guò)濾TFF、色譜純化及超速離心；純化后的LV病毒顆粒經(jīng)過(guò)無(wú)菌過(guò)濾，更換到優(yōu)化后的配方中，灌裝并冷凍保存。每批Car-T生產(chǎn)時(shí)取對(duì)應(yīng)量的LV病毒，切忌反復(fù)凍融，否則LV病毒會(huì)失活。東臺(tái)高鹽核酸酶款式哪家好呢，歡迎咨詢上海倍篤生物 。青海上海倍篤生物高鹽核酸酶70921

SAN HQ用量是Benzonase用量的1/3-1/4，酶用量更少，成本更低、工藝更簡(jiǎn)單。上海ArcticZymes高鹽核酸酶

核酸酶活性受到很多因素影響，如鹽濃度、pH、底物、溫度等。因此，不同客戶、不同項(xiàng)目中核酸酶的使用條件都不一樣。目前，生物制藥行業(yè)對(duì)Benonase全能核酸酶的使用比較熟悉，如生理鹽或低鹽濃度、脫鹽操作等。對(duì)于AdV/AAV等項(xiàng)目，使用SAN HQ高鹽核酸酶替代Benzonase時(shí)，只需提高反應(yīng)體系總鹽濃度到400mM-500mM即可，溫度、Mg2+濃度等條件不用做任何調(diào)整，同樣酶量的SAN HQ對(duì)宿主細(xì)胞DNA（HCD）的去除效果更好、病毒載體得率更高。經(jīng)過(guò)工藝優(yōu)化后，可以將SAN HQ高鹽核酸酶的用量減少到原來(lái)的1/3-1/4，且HCD去除效果及產(chǎn)品得率更高。上海ArcticZymes高鹽核酸酶