表達HLA-A2的EndoC-βH5-HLA-A2系是通過每105細胞使用100ngp24衣殼蛋白與pTRIPDU3CMVHLA-A2IRESPURO慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)EndoC-βH5來產(chǎn)生的。在1mg/ml嘌呤霉素存在下將細胞擴增三周以選擇轉(zhuǎn)導(dǎo)的細胞。為了完全成熟，將EndoC-βH5和EndoC-βH5-HLA-A2細胞再培養(yǎng)3周，并用5mM他莫昔芬和0.5mM更昔洛韋處理，以切除永生化基因并選擇切除的細胞。使用胰蛋白酶（25300e054）收集所得細胞，表達EndoC-βH5細胞的修飾HLA-A2引發(fā)同種異體反應(yīng)性T淋巴細胞ji huo，概括了1型糖尿病中涉及的一些自身免疫機制。糖尿病細胞模型EndoC-BH5 細胞以 1e2 105 細胞/孔接種到 BCoat包被的8 孔 IBIDI 室載玻片上。安徽糖尿病細胞模型細胞活力好

EndoC-βH5,GLTxEndoC-βH5,HLA-A2EndoC-βH5等細胞可在體外在葡萄糖劑量刺激下產(chǎn)生正常的胰島素分泌反應(yīng)，對GLP-1R/GLP-1等胰島素刺激因子產(chǎn)生正常響應(yīng)，可以響應(yīng)細胞因子刺激，表達HLA-A2等T細胞受體，因此可用于糖尿病炎癥相關(guān)等多種藥物開發(fā)實驗。EndoC-BH5細胞可批量穩(wěn)定生產(chǎn)，因此可以進行基于siRNA的高通量篩選研究中，用于鑒定出潛在的2型糖尿病藥物靶點。另外，Humancelldesign根據(jù)法國生物倫理立法收集人類胎兒組織，獲得法國生物醫(yī)學(xué)局（巴黎）的批準，批準號為PFS08-005。重慶糖尿病細胞模型無菌環(huán)境操作全球200+學(xué)術(shù)與制藥實驗室測試和批準了Huamn cell design(HCD)的糖尿病細胞模型。

糖尿病細胞模型應(yīng)用概括如下：1、細胞因子介導(dǎo)的糖尿病炎癥反應(yīng)（一/二型糖尿病）：胰島β細胞保護機制研究，胰島β細胞炎癥反應(yīng)研究，誘導(dǎo)胰島β細胞炎癥反應(yīng)化合物篩選2、T細胞介導(dǎo)的胰島細胞殺傷實驗（一型糖尿病）：胰島β細胞保護機制研究，T細胞抑制機制，β細胞和T細胞作用機制研究3、葡萄糖脂毒性研究:胰島β細胞鑒定marker，胰島β細胞功能性marker，胰島β細胞糖脂化合物研究4、篩選胰島素分泌促進藥物：促胰島素分泌藥物篩選，功能機制研究，干細胞zhi liao糖尿病參照對比5、基于高通量篩選的siRNA靶標驗證和篩選：高通量胰島β細胞靶點鑒定和篩選，糖尿病疾病模型構(gòu)建，促胰島素分泌藥物篩選6、干細胞zhi liao糖尿病：參照對比

EndoC-βH5細胞是一種新型人類胰腺β細胞解決方案，可用于開發(fā)人類糖尿病模型以及藥物篩選和驗證平臺，產(chǎn)生流程為：DNA構(gòu)建，慢病毒載體產(chǎn)生，人胎兒胰腺外植體與pTRIPDU3loxP-pY-TK-RIP405-SV40-LT和pTRIPDU3loxPpY-TK-RIP405-hTERT慢病毒載體共轉(zhuǎn)導(dǎo)，移植到SCID小鼠的腎囊下，導(dǎo)致八個月后形成胰島素瘤，從而獲得EndoC-βH5。EndoC-βH1和增殖的EndoC-βH5細胞分別在Opti-β1和Ulti-b1培養(yǎng)基中的βCoat涂層塑料板上培養(yǎng)。使用胰蛋白酶（0.05%）每7天繁殖一次細胞。流式細胞術(shù)分析表明所有EndoC-βH5細胞均呈胰島素陽性，并且在絕大多數(shù)細胞中檢測到PDX1和NK6.1表達（分別為92.3%和90%）。EndoC-βH5細胞在涂層塑料上形成小的貼壁簇。Human cell design為客戶提供多種胰島B細胞類型的操作手冊。

人源胰島B細胞模型對于與胰島相關(guān)的代謝疾病研究，包括糖尿病，糖尿病炎癥， 針對GLP-1R的Exendin4等類似藥物開發(fā)有重要作用。通過干細胞誘導(dǎo)B細胞產(chǎn)生的胰島B細胞存在純度較低，缺乏成熟胰島B細胞功能等問題。通過捐贈組織的胰腺B細胞提取，存在供應(yīng)量較低，明顯批次效應(yīng)，耗時較長等問題。使用糖尿病動物模型進行研究會比糖尿病細胞模型成本更高昂，周期更長。Human cell design 構(gòu)建了EndoC-BH1,En-doC-BH3, EndoC-βH5, GLTx EndoC-βH5 , HLA-A2 EndoC-βH5等一系列的胰島B細胞模型。EndoC-B h1和EndoC-B h5的區(qū)別或者異同點？EndoC-bH細胞家族糖尿病細胞模型慢病毒載體構(gòu)建方法

糖尿病細胞模型真實模擬胰島B細胞分泌，且分泌性強。安徽糖尿病細胞模型細胞活力好

EndoC-βH5細胞dai biao了一種獨特的可儲存且隨時可用的人類胰腺β細胞模型，具有高度穩(wěn)健和可重復(fù)的特征。因此，此類細胞與β細胞功能的研究、新藥的篩選和驗證以及疾病模型的開發(fā)相關(guān)。RNAseq研究已經(jīng)證實了β細胞轉(zhuǎn)錄因子和功能標記物（包括腸促胰島素受體）的豐富表達，并且細胞因子誘導(dǎo)炎癥途徑以及抗原加工和呈遞的基因表達特征。同時表達EndoC-βH5細胞的修飾HLA-A2可以引發(fā)特異性A2同種異體反應(yīng)性CD8T細胞ji huo。Human cell design 構(gòu)建了EndoC-BH1,En-doC-BH3, EndoC-βH5, GLTx EndoC-βH5 , HLA-A2 EndoC-βH5等一系列的胰島B細胞模型。安徽糖尿病細胞模型細胞活力好