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江蘇外泌體攝取

來源: 發布時間:2023年12月26日

外泌體(Exosome),是細胞外囊泡(EV)的一種主要類型,是直徑為30至150nm的納米大小的膜結構,大多數細胞都會分泌外泌體。外泌體存在于各種生物體液中,通過其攜帶的蛋白質、核酸、脂質和代謝物等來發揮細胞間通訊功能,參與免疫應答、代謝和心血管疾病、神經退行性疾病以及病癥進展等多種生理和病理過程。在內體轉變為成熟多囊泡內體(MVE)的過程中,內體膜向腔內出芽形成腔內囊泡(ILV),MVE與細胞膜融合釋放ILV到細胞外,即形成外泌體。外泌體作為核酸分子的藥物載體主要用于基因治理。江蘇外泌體攝取

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血清和血漿為常規檢測樣本,具有微創取樣的優點,是診斷疾病的理想樣本。血液中外泌體能夠作為胰腺ai、胃ai、肺ai和阿爾茲海默等疾病的早期診斷和療效評價提供潛在標志物。血液外泌體來源的疾病標志物主要包括蛋白質和miRNA兩類。Melo等發現利用胰腺ai細胞外泌體表面的磷脂酰肌醇聚糖-1(GPC1)能夠實現胰腺ai早期診斷,利用該方法對血清中包含GPC1的外泌體進行檢測,能夠高特異性(100%)、高靈敏度(100%)地區分胰腺ai患者(246例)和正常人(20例)以及慢性胰腺炎患者(37例)。江蘇外泌體攝取外泌體及活性蛋白能直接穿透皮膚間隙,快速直達基底層起效。

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Vlassov等人發表的一篇外泌體的提取方法及組成的專利文獻中介紹,通過終濃度為8%的PEG6000與生物體液共孵育14h后,10000xg離心1h,可將直徑在30-150nm之間,且包含豐富RNA的外泌體沉淀下來。因此采用終濃度為8%的PEG6000沉淀血清中的外泌體,為了進一步純化胎盤相關外泌體,將獲得的包含外泌體的沉淀用PBS重新懸浮后,加入非線性蔗糖密度梯度層,10000xg超速離心5h,將分層液采用PEG6000進行2次沉淀。經過多次實驗反復驗證,確定同時表達外泌體標志蛋白分子及胎盤特異性蛋白分子的胎盤來源外泌體所在密度層。

血清中的miR-122和miR-145非常不穩定,將血清在4°C短期保存期間即發生降解,這可能是由外泌體的異質性所導致的。–80°C保存被公認是保存各種生物標本如尿、牛奶、血液和支氣管肺泡灌洗液適宜的保存環境,雖然這樣保存血漿可能產生含有大量“污染物”的外泌體。4°C保存雖然容易導致外泌體中蛋白和核酸的損失,但卻能夠避免凍融過程造成的囊泡破壞。外泌體雖然建議保存于-80°C環境下,但在處理或運輸過程中有時很難維持這種低溫條件。CHAROENVIRIYAKUL等提出一種凍干法以保存外泌體,在冷凍過程中使用海藻糖作為保護劑,海藻糖可以提供生物保護作用,如穩定蛋白質、細胞膜和脂質體;減少冷凍過程中冰的形成;防止蛋白質以及外泌體的聚集;減少分離和保存過程中細胞外囊泡的損失等?;顑鹊耐饷隗w動態(哪個外泌體遷移至何處)也會成為今后需要努力研究的重要課題。

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目前,在各種健康與疾病模型中都發現,外泌體通過分子信息傳遞扮演著重要的角色。外泌體還越來越多地被認為是疾病的生物標志物和預后因子,具有重要的臨床診斷和治理意義。除此之外,它們還有潛力被用于臨床,作為基因和藥物遞送的載體。健康人和多種疾病的患者會將含有不同RNA和蛋白質成分的外泌體釋放到體液循環中,因其特殊性,外泌體可以作為生物標志物來對疾病進行檢測。例如,從血液或尿液中分離的外泌體可以用作病癥、心臟病的診斷和預后的指標。外泌體其純度與超離心法和PEG沉淀法提取外泌體做比較。江蘇外泌體攝取

從體液和培養上清中高純度提取的高純度外泌體,在活內是否真的能發生作用尚未能確定。江蘇外泌體攝取

在利用外泌體運輸PTX進行抗中流的研究中,由于間充質干細胞可以歸巢(homing)至中流細胞微環境并且可以不通過基因操作即可對PTX運輸,因此Pessina等采用間充質干細胞SR4987作為分泌外泌體的母代細胞,而后將SR4987與PTX共混,使SR4987分泌的外泌體含有PTX,再利用超速離心法將載有PTX的外泌體分離出來,研究其對體外人胰腺ai細胞株的影響。結果表明外泌體可以有效的運載PTX并不破壞其功能,小泡(主要指外泌體)溶液的蛋白質濃度在0.047~0.095mg/mL之間時可以誘導中流細胞凋亡50%,這種抑制效果與純PTX對體外ai細胞的抑制效果相當。江蘇外泌體攝取

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