隨著科學(xué)研究的不斷深入，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)外泌體是由通過(guò)細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成多泡內(nèi)涵體，多泡內(nèi)涵體再與細(xì)胞膜融合后，釋放到細(xì)胞外基質(zhì)中的一種直徑約30~120nm的膜性囊泡。外泌體介導(dǎo)瘤細(xì)胞的化療抵抗。在瘤的治理過(guò)程中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)藥物耐受的情況，這會(huì)導(dǎo)致化療失敗，在這和過(guò)程中外泌體以多種途徑參與了化療抵抗這一過(guò)程。通常，發(fā)生EMT過(guò)程的瘤細(xì)胞可獲得抵抗凋亡能力，而抵抗凋亡通常使瘤表現(xiàn)為化療抵抗。瘤細(xì)胞來(lái)源的外泌體能通過(guò)傳遞相關(guān)的組織因子(如VEGF、TGF2β)介導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生EMT，從而增加瘤細(xì)胞的化療抵抗能力。外泌體可以作為生物標(biāo)志物來(lái)對(duì)疾病進(jìn)行檢測(cè)。遼寧外泌體circRNA測(cè)序

研究采用蔗糖密度梯度離心聯(lián)合2次PEG6000沉淀，極大地降低了外泌體的提取成本，且獲得的外泌體不僅表達(dá)外泌體公認(rèn)的標(biāo)志蛋白分子，同時(shí)也表達(dá)胎盤(pán)特異性蛋白分子，證明通過(guò)這種方法獲得的外泌體是胎盤(pán)來(lái)源外泌體。通過(guò)蔗糖密度梯度離心后得到的外泌體沉淀經(jīng)蛋白質(zhì)SDS-PAGE膠電泳，銀染后可見(jiàn)各蛋白分子條帶清晰可見(jiàn)，動(dòng)態(tài)光散射分析粒徑，結(jié)果顯示獲得的外泌體顆粒粒徑大部分分布于28-91nm之間，與文獻(xiàn)報(bào)道外泌體顆粒大小相一致。胎盤(pán)外泌體經(jīng)過(guò)PKH67熒光染料染色后，與細(xì)胞共孵育，熒光顯微鏡下觀察外泌體具備進(jìn)入細(xì)胞的活性，進(jìn)一步驗(yàn)證了我們應(yīng)用此種改良的分離方法可有效的獲得胎盤(pán)來(lái)源的外泌體。本研究通過(guò)蔗糖密度梯度離心聯(lián)合2次PEG6000沉淀成功分離得到母體血清中胎盤(pán)來(lái)源外泌體，并從蛋白標(biāo)志分子、電鏡、粒徑及分布、進(jìn)入細(xì)胞活性四方面對(duì)其進(jìn)行了鑒定，為研究妊娠期間胎盤(pán)外泌體在正常妊娠及胎盤(pán)源性并發(fā)癥中的作用奠定了基礎(chǔ)。遼寧外泌體circRNA測(cè)序在抗原呈遞細(xì)胞中的外泌體發(fā)揮作用的報(bào)道后，人們對(duì)外泌體的興趣增強(qiáng)。

Vlassov等人發(fā)表的一篇外泌體的提取方法及組成的專(zhuān)利文獻(xiàn)中介紹，通過(guò)終濃度為8%的PEG6000與生物體液共孵育14h后，10000xg離心1h，可將直徑在30-150nm之間，且包含豐富RNA的外泌體沉淀下來(lái)。因此采用終濃度為8%的PEG6000沉淀血清中的外泌體，為了進(jìn)一步純化胎盤(pán)相關(guān)外泌體，將獲得的包含外泌體的沉淀用PBS重新懸浮后，加入非線(xiàn)性蔗糖密度梯度層，10000xg超速離心5h，將分層液采用PEG6000進(jìn)行2次沉淀。經(jīng)過(guò)多次實(shí)驗(yàn)反復(fù)驗(yàn)證，確定同時(shí)表達(dá)外泌體標(biāo)志蛋白分子及胎盤(pán)特異性蛋白分子的胎盤(pán)來(lái)源外泌體所在密度層。

雖然系統(tǒng)遞送的外泌體主要在肝臟、腎臟和脾臟中積累，但通過(guò)在外泌體的外表面上展示特定的靶向分子。例如，識(shí)別靶抗原的肽或抗體片段，可以獲得靶向外泌體；通過(guò)在細(xì)胞分泌囊泡上展示糖基磷脂酰肌醇（GPI）錨定的納米抗體，可以使細(xì)胞分泌囊泡顯示多種蛋白，包括抗體、熒光蛋白和信號(hào)分子。自然分泌的外泌體分離純化直接作為藥物的潛力有限，但是，將自然的外泌體分泌所需組分摻入合成脂質(zhì)體或納米顆粒中，并且使用可控程序組裝后的工程化外泌體模擬物在藥學(xué)上擁有更大的應(yīng)用潛力。近些年關(guān)于外泌體研究很普遍。

血清和血漿為常規(guī)檢測(cè)樣本，具有微創(chuàng)取樣的優(yōu)點(diǎn)，是診斷疾病的理想樣本。血液中外泌體能夠作為胰腺ai、胃ai、肺ai和阿爾茲海默等疾病的早期診斷和療效評(píng)價(jià)提供潛在標(biāo)志物。血液外泌體來(lái)源的疾病標(biāo)志物主要包括蛋白質(zhì)和miRNA兩類(lèi)。Melo等發(fā)現(xiàn)利用胰腺ai細(xì)胞外泌體表面的磷脂酰肌醇聚糖-1(GPC1)能夠?qū)崿F(xiàn)胰腺ai早期診斷，利用該方法對(duì)血清中包含GPC1的外泌體進(jìn)行檢測(cè)，能夠高特異性(100%)、高靈敏度(100%)地區(qū)分胰腺ai患者(246例)和正常人(20例)以及慢性胰腺炎患者(37例)。不同類(lèi)別的外泌體囊泡有三個(gè)征：表面具涂層的膜泡、內(nèi)含纖維的膜泡、電子致密囊泡。遼寧外泌體circRNA測(cè)序

血液中的成纖維細(xì)胞所釋放的外泌體，可以促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞的移動(dòng)和增殖以及血管新生來(lái)促進(jìn)傷口愈合。遼寧外泌體circRNA測(cè)序

密度梯度離心是基于差速超高速離心的改良技術(shù)。該方法需預(yù)先利用常用的梯度液介質(zhì)如蔗糖、碘克沙醇和氯化銫等，在離心管中構(gòu)筑從底部到頂部密度逐漸降低的密度梯度帶。根據(jù)密度梯度構(gòu)建和沉降方式的不同,又可以分為速率區(qū)帶離心法和等密度梯度離心法,前者主要根據(jù)顆粒的沉降速率分離,介質(zhì)密度均小于外泌體密度,離心時(shí)樣品在向超速離心管底部移動(dòng)時(shí),會(huì)通過(guò)密度不斷增加的密度梯度區(qū)帶,密度大的顆粒更容易穿過(guò)密度更高的梯度層,更快地到達(dá)管底,因此控制離心的時(shí)間很重要;等密度梯度離心法中的密度梯度區(qū)帶,則會(huì)根據(jù)樣品液中各種溶質(zhì)成分來(lái)進(jìn)行組合,離心過(guò)程中,無(wú)論離心時(shí)間多久,不同密度顆粒jin會(huì)富集到具有相同密度的梯度區(qū)帶,而不會(huì)沉淀到底部。遼寧外泌體circRNA測(cè)序