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PCFA培養基基礎

來源: 發布時間:2023年03月30日

1951年厄爾開發了供動物細胞體外生長的人工合成培養基(MEM)。合成培養基的種類相當多。合成培養基成分已知,便于對實驗條件的控制。但與天然培養基相比,有些天然的未知成分尚無法用已知的化學成分所替代,因此,細胞培養中使用的基礎合成培養基還必須加入一定量的天然培養基成分,以克服合成培養基的不足。普遍的作法是加入小牛血清。動物血清成分復雜,各種生物大小分子混合在一起,有些成分至今尚未搞清楚。血清對細胞生長很有效,但后期對培養產物的分離、提純以及檢測造會成一定困難。另外高質量的動物血清來源有限,成本高,限制了它的大量使用。無血清培養基不加動物血清,在基礎培養基中加入細胞生長有效因子等。在有些情況下,培養基還需要進行一些化學處理。PCFA培養基基礎

培養基

培養基按成分分類有哪些?按形態分類:培養基按其不同的物理狀態,可分為液體、流體、半固體和固體4類,培養基的物理狀態取決于培養基中是否加人凝固劑或凝固劑的加入量。1、液體培養基(liquidnutrientmedium)不加任何凝固劑,常溫下以完全液態存在的培養基,如肉湯培養基或一般液體增菌培養基。2、流體培養基(semi-liquidmedium)在液體培養基中加入0.05%~0.1%的瓊脂粉,使其具一定黏度,即成流體培養基。加入瓊脂粉增加了培養基的黏度,降低空氣中的氧氣進人培養基的速度,能使培養基保持較長時間的厭氧條件,有利于一般厭氧菌的生長繁殖,如硫乙醇酸鹽培養基、改良馬丁培養基等。一般用于霉菌和厭氧菌檢查的液體培養基中可加人少量瓊脂使其成為流體培養。PCFA培養基基礎常見的細菌類培養基包括營養瓊脂培養基、大腸桿菌培養基、金黃色葡萄球菌培養基等等。

PCFA培養基基礎,培養基

選擇性培養基(selective media) 選擇性培養基含有營養物(增菌劑)和抑菌劑(選擇劑),標本接種于此類培養基后,由于抑菌劑的選擇性抑制作用,使非目的菌受到不同程度的抑制,更有利于目的菌的增殖或分離。利用選擇性培養基經過一定時間的增菌培養,再接種于選擇性鑒別培養基,可以提高目的菌的陽性檢出率。抑菌劑的種類很多,常用的有孔雀綠、燦爛綠、亞硒酸鈉、去氧膽酸鈉、膽鹽、四硫磺酸鈉等。抑菌劑的加入量要適宜、準確,有的劇毒,有的不耐高熱,配制時須特別注意。

按照培養基用途區分:鑒別培養基,一類在成分中加有能與目的菌的無色代謝產物發生顯色反應的指示劑,從而達到只須用肉眼辨別顏色就能方便的從近似菌落中找出目的菌菌落的培養基。例如,伊紅美藍乳糖培養基(EMB)。培養基的分類有哪些?培養基按功能用途可分為幾種?培養基的分類有哪些?培養基按功能用途可分為幾種?常見的培養基有細菌培養基、牛心培養基、根瘤菌培養基、放線菌培養基、面粉瓊脂培養基、微藻培養基、豆芽汁培養基、食用菌菌種培養基、動物細胞培養基等等。致病菌常用的培養基包括營養瓊脂平板培養基、馬鈴薯葡萄糖瓊培養基。

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總體而言,所有微生物生長繁殖均需要培養基含有碳源、氮源、無機鹽、生長因子、水及能源,但由于微生物營養類型復雜,不同微生物對營養物質的需求是不一樣的,因此首先要根據不同微生物的營養需求配制針對性強的培養基。自養型微生物能從簡單的無機物合成自身需要的糖類、脂類、蛋白質、核酸、維生素等復雜的有機物,因此培養自養型微生物的培養基完全可以(或應該)由簡單的無機物組成。例如,培養化能自養型的氧化硫硫桿菌(Thiobacillus thiooxdans)的培養基組成見表3.9。在該培養基配制過程中并未專門加入其他碳源物質,而是依靠空氣中和溶于水中的CO2為氧化硫硫桿菌提供碳源。細菌類培養基則包括馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基、麥芽瓊脂培養基等等。PCFA培養基基礎

制備培養基需要考慮生長細胞所需的營養、酸堿度和水分含量等因素。PCFA培養基基礎

近年來,國內外利用某些細菌特有的酶,選擇相應的作用底物,研制出某些細菌專門用的的顯色培養基,用于細菌的分離鑒別,收到了良好的效果,這種顯色培養基實際上也是鑒別培養基。其基本原理是將色原(或熒光原)與細菌作用底物的結合物加于培養基中,當細菌含有相應酶時,使該結合物分解而顯色(或顯示熒光)。如色原糖苷結合物在糖苷酶作用下分解,使糖苷與色原分離,并顯示顏色;熒光氨基酸結合物(不顯熒光)在氨基肽酶作用下,使氨基酸與熒光物質分離而顯示熒光。常用顯色的色原有α-萘酚、β-萘酚、鄰位硝基酚、對位硝基酚、對硝基苯胺、酚酞、2-氨基4-硝基苯等;常用的熒光物有4-甲基傘形酮(又稱7-羥基4-甲基香豆素)等。目前,顯色培養基已用于多種細菌的分離鑒別培養,如沙門菌、大腸埃希菌、李斯特菌、雙歧桿菌和乳酸桿菌、白色念珠菌等顯色培養基。PCFA培養基基礎

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標簽: 培養基
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