在制備培養(yǎng)基的過程中,安全是第1原則。要保證培養(yǎng)基的無菌性、無致病性、無致變性,避免應(yīng)用醫(yī)療性維生素、肽聚糖、半合成血清等,以避免在細(xì)胞培養(yǎng)等實驗過程中產(chǎn)生的雜菌和微生物的病變,對實驗過程的準(zhǔn)確性和可靠性產(chǎn)生不利影響。培養(yǎng)基中含有營養(yǎng)成分,必須考慮基本食物成分(水、碳水化合物、蛋白質(zhì)、脂肪、維生素、微量元素等)作為通用要素。不同類型的生物需要不同的營養(yǎng)成分,因此在制備培養(yǎng)基時必須注意保證各種營養(yǎng)成分的均衡和充足,以確保生物體生長、繁殖的需要和生理上的健康狀況。如果細(xì)菌的生長受到限制,可以嘗試調(diào)整培養(yǎng)基的成分或添加輔助物質(zhì),例如控制培養(yǎng)基中氧氣的含量。Chapman Stone瓊脂培養(yǎng)基
生長基(也稱為普遍培養(yǎng)基,Nutrient Agar)是較常用的預(yù)裝培養(yǎng)基之一,由肉湯、酵母提取物和瓊脂組成,其中肉湯作為氮源,酵母提取物是有機(jī)碳源,瓊脂則提供了基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)。這種培養(yǎng)基適用于大多數(shù)微生物的生長,可用于分離和純化菌落。微生物篩選基涵蓋了不同類型的預(yù)裝培養(yǎng)基,例如:MacConkey Agar、Eosin Methylene Blue Agar(EMB)、Sabouraud Agar等等。這些培養(yǎng)基是為了篩選或區(qū)別不同類型的微生物而設(shè)計的,比如MacConkey Agar用于篩選革蘭氏陰性桿菌,EMB用于篩選帶有發(fā)酵代謝特征的細(xì)菌,而Sabouraud Agar則是用于細(xì)菌的培養(yǎng)。特定微生物培養(yǎng)基是為了培養(yǎng)和分離特定微生物而設(shè)計的,比如:Thayer Martin Agar是專門用于淋球菌的培養(yǎng)基,Lowenstein Jensen Agar是用于結(jié)核分枝桿菌的培養(yǎng)基。因為這些特定微生物通常較為難培養(yǎng),所以特定的培養(yǎng)基在選擇上尤為重要。Chapman Stone瓊脂培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基時必須注意 pH 值和溫度的測量和調(diào)節(jié)。
HBS 和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在 Eagle′s(2.2g/L) 中比在 Hanks′(0.35g/L)中高。碳酸氫鈉需用高水平的 CO2 平衡,以維持溶液的 PH 值。Eagle′s 液在空氣水平的CO2中,溶液會變堿,Hanks′液在 CO2 培養(yǎng)箱中會變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織,需要用Eagle′s液,如果只是清洗將要在細(xì)胞培養(yǎng)基中儲存的組織,用Hanks′液就可以了。由于大多數(shù)細(xì)胞適宜pH為7.2-7.4,偏離此范圍可能對細(xì)胞生長將產(chǎn)生有害的影響。但各種細(xì)胞對pH的要求也不完全相同,原代培養(yǎng)細(xì)胞一般對pH變動耐受差,無限細(xì)胞系耐受力強(qiáng)。但總體來說,細(xì)胞耐酸性比耐堿性強(qiáng)一些。在配制培養(yǎng)用液時,需要注意一點:新配的培養(yǎng)基在經(jīng)過 0.10um 或 0.22um 濾膜過濾時,溶液的pH 還會向上浮動0.2左右。
預(yù)裝培養(yǎng)基可能對某些微生物產(chǎn)生毒性影響。預(yù)裝培養(yǎng)基在生產(chǎn)過程中可能含有某些添加劑,例如維生素、抑菌劑和染料等,以防止微生物污染。然而,這些添加劑也可能會影響微生物的生長和生命周期。比較好的做法是在不確定是否適合使用預(yù)裝培養(yǎng)基的情況下,可以嘗試使用小批量的預(yù)裝培養(yǎng)基來進(jìn)行一些試驗,以確定微生物能否正常生長。什么樣的微生物較適合使用預(yù)裝培養(yǎng)基呢?通常,較為簡單的微生物,例如大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌等,是預(yù)裝培養(yǎng)基的合適候選者。這些微生物有著比較簡單和標(biāo)準(zhǔn)的營養(yǎng)需求,容易在預(yù)裝培養(yǎng)基上生長。對于一些較為復(fù)雜的微生物,例如細(xì)菌、細(xì)胞和非典型微生物,預(yù)裝培養(yǎng)基毫無疑問是無法滿足其復(fù)雜的營養(yǎng)需求的。培養(yǎng)基是細(xì)胞和微生物生長所需的基本營養(yǎng)物質(zhì)和環(huán)境條件。
選擇性培養(yǎng)基(selective media) 選擇性培養(yǎng)基含有營養(yǎng)物(增菌劑)和抑菌劑(選擇劑),標(biāo)本接種于此類培養(yǎng)基后,由于抑菌劑的選擇性抑制作用,使非目的菌受到不同程度的抑制,更有利于目的菌的增殖或分離。利用選擇性培養(yǎng)基經(jīng)過一定時間的增菌培養(yǎng),再接種于選擇性鑒別培養(yǎng)基,可以提高目的菌的陽性檢出率。抑菌劑的種類很多,常用的有孔雀綠、燦爛綠、亞硒酸鈉、去氧膽酸鈉、膽鹽、四硫磺酸鈉等。抑菌劑的加入量要適宜、準(zhǔn)確,有的劇毒,有的不耐高熱,配制時須特別注意。常見的細(xì)菌類培養(yǎng)基包括營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、大腸桿菌培養(yǎng)基、金黃色葡萄球菌培養(yǎng)基等等。Chapman Stone瓊脂培養(yǎng)基
液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基和半固態(tài)培養(yǎng)基是常用的培養(yǎng)基種類。Chapman Stone瓊脂培養(yǎng)基
培養(yǎng)基的種類有哪些?鑒別培養(yǎng)基:利用細(xì)菌分解糖類和蛋白質(zhì)的能力及其代謝產(chǎn)物的不同,在培養(yǎng)基中加入特定的作用底物和指示劑,觀察細(xì)菌生長過程中分解底物所釋放的不同產(chǎn)物,通過指示劑的反應(yīng)不同來鑒別細(xì)菌。例如糖發(fā)酵管、克氏雙糖鐵瓊脂(KIA)、伊紅-亞甲藍(lán)瓊脂和動力-吲哚-尿素(MIU)培養(yǎng)基等。選擇培養(yǎng)基:在培養(yǎng)基中加入抑制劑,去抑制標(biāo)本中的雜菌生長,有助于所選擇的細(xì)菌種類的生長。例如培養(yǎng)腸道致病菌的SS瓊脂,其中的膽鹽能抑制革蘭陽性菌,枸櫞酸鈉和煌綠能抑制大腸埃希菌,因而使致病的沙門菌、志賀菌容易分離到。Chapman Stone瓊脂培養(yǎng)基
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