無信號 在檢測之前,轉印膜在貯藏過程中發 生蛋白降解 二抗選擇錯誤 曝光時間太短 抗原上樣量不足 抗原可能被破壞 檢測系統 一抗的親和力較低 化學發光底物已喪失活性。 已從膜上剝離抗體并再次雜交。 處理方法 使用新轉的膜進行實驗。 檢查是否使用適當的二抗。 增加曝光時間。 在凝膠上載入更多的抗原,或在載入之前使用超濾管濃縮樣品, 或使用免疫沉淀,以增加凝膠中的目標蛋白量。 檢查確保電泳處理未破壞抗原性。 增加(和優化)一抗的濃度和培養時間、溫度。找Abcam抗體哪家靠譜?寶山區鑒定抗體抗體聯系人
模塞只器生產廠家說明書,校準Luminex儀器,至少每周一次或在溫度變化3℃時校準。 一些Luminex儀器要求與試劑盒方案中所述不同的門)設置。使用儀器默認設置。 檢查試劑盒說明書中正確的微珠區域或分析物選擇。 含有機溶劑的樣品,或如果樣品為高粘性,應根據需要進行稀釋或透析。PMimeLuminex只器4次,以除去氣泡;如果有任何殘留酒精或消毒液,用酒精或消毒液或水洗滌4次 在所有解育步理中,保持微孔板和微珠混合物用果蓋或鋁培覆蓋。加入適當的檢測執體并繼線t。奉賢區Calbiochem抗體抗體代理價CST抗體的報價具體是多少呢?
Troubleshooting 問題 微珠計數不足 本底過高 微珠不在制定的區域內或圈門中 整個微孔板的信號與本底相同 陽性對照的信號任樣品信號過高或飽和 樣品信號過低 樣品和/或標準品CV值較大 微孔板洗板機吸液高度設置過低微珠混合物配制不當 樣品顆粒物或粘度引起干擾 沒有正確調整探針高度 本底孔受污染 洗滌不充分 Luminex只器沒有正確校準或近期沒有校準 沒有正確詞整門設置 微珠區域設置錯誤所用樣品類型不正確只器沒有洗滌或primed 做珠暴露于光下檢測不正確或檢測不到未加入抗體
關于抗體質量 抗體的質量決定了整個免疫檢測的成敗, 是在選擇抗體時優先的考慮因素。 通常認為,特異性決定抗體功能,所以抗體必須擁有高質量,尤其是商業化的抗體。然而出人意料的是,通常情況并非如此。盡管理論上確實可以模擬和預測抗體結合的特異性,但是數十年的使用經驗證明,一些因素如免疫原的抗原性和***性、抗體濃度、緩沖液、免疫作用和樣品制備等因素都會對交叉反應和非特異性結合起到***的促進作用。 自70年代以來,當研究人員開始將抗體用作蛋白探針時,抗體性能不一致的問題一直困擾著他們。上海WB抗體哪家靠譜?
在陰性對照(igG或mockIP)樣品中本底較高 抗體過量導致抗體與非靶蛋白結合∶ 與珠子的非特異性結合∶ 染色質的不完金裂解∶ 試劑污染∶ "無DNA" PCR反應顯示信號 DNA的較低回收率 ChIP抗體無效或較低親和力: ChIP抗體不足: 起始樣品不足: 細胞不完全溶解和無效裂解: 交聯過度: 交聯不足: 親和力較低或珠子質量較差: PCR引物: 優化抗體的濃度。 加入-個殘***步理,以除這些非特異性蛋白或添加珠子的阻斷劑。 優化取解過程,以民得介于200-100bp長度的染色質。Merck抗體的報價具體是多少呢?奉賢區Calbiochem抗體抗體代理價
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問題 可能的原因 處理方法 印跡上出現條紋 在凝膠的蛋白負荷過量。 準確測量蛋白濃度,載入較少的蛋白。 印跡有污染或模糊 凝膠平衡不當,或在實驗過程中收縮 檢查凝膠平衡時間。 采用麗春紅S染色時, 轉膜無效 轉膜時,小心除去氣泡。 印跡染色較差 確保在電轉過程中因為溫度過高而產生氣泡或凝膠/膜變形 采用麗春紅S染色時, 在轉膜過程中蛋白沒有轉移 檢查設備(轉膜盒、盒蓋、電源)。 印跡沒有染色 檢查在轉膜過程中凝膠和膜的順序是 確保膜位于凝膠的右側。 否正確寶山區鑒定抗體抗體聯系人
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