培養(yǎng)基的pH必須控制在一定的范圍內(nèi),以滿足不同類型微生物的生長(zhǎng)繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物。各類微生物生長(zhǎng)繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的較適pH條件各不相同,一般來(lái)講,細(xì)菌與放線菌適于在pH7-7.5范圍內(nèi)生長(zhǎng),酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范圍內(nèi)生長(zhǎng)。值得注意的是,在微生物生長(zhǎng)繁殖和代謝過(guò)程中,由于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被分解利用和代謝產(chǎn)物的形成與積累,會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基pH發(fā)生變化,若不對(duì)培養(yǎng)基pH條件進(jìn)行控制,往往導(dǎo)致微生物生長(zhǎng)速度下降或(和)代謝產(chǎn)物產(chǎn)量下降。因此,為了維持培養(yǎng)基pH的相對(duì)恒定,通常在培養(yǎng)基中加入pH緩沖劑,常用的緩沖劑是一氫和二氫磷酸鹽(如KH2PO4和K2HPO4)組成的混合物。K2HPO4溶液呈堿性,KH2PO4溶液呈酸性,兩種物質(zhì)的等量混合溶液的pH為6.8。當(dāng)培養(yǎng)基中酸性物質(zhì)積累導(dǎo)致H+濃度增加時(shí),H+與弱堿性鹽結(jié)合形成弱酸性化合物,培養(yǎng)基pH不會(huì)過(guò)度降低;如果培養(yǎng)基中OH-濃度增加,OH-則與弱酸性鹽結(jié)合形成弱堿性化合物,培養(yǎng)基pH也不會(huì)過(guò)度升高。無(wú)血清培養(yǎng)基是在常規(guī)培養(yǎng)基中添加多種蛋白質(zhì)、生長(zhǎng)因子等等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)來(lái)代替動(dòng)物血清。心浸液瓊脂(強(qiáng)化配方)HIA培養(yǎng)基
bFGF是一個(gè)肝素結(jié)合的多膚類絲裂源,普遍分布于各種組織中。bFGF 是一種重要的細(xì)胞增殖分化調(diào)節(jié)劑,可刺激多種細(xì)胞的增殖。有研究發(fā)現(xiàn)它對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞也有促增殖作用。bFGF 主要是與細(xì)胞膜上FGF受體結(jié)合發(fā)揮作用,刺激與增殖有關(guān)的基因表達(dá)。Thomson 等認(rèn)為,像其他體外培養(yǎng)的人體細(xì)胞一樣,hES 細(xì)胞要求 bFGF 的存在以促進(jìn)增殖。同理EGF(上皮生長(zhǎng)因子) , 是人體內(nèi)的一種活性物質(zhì),由53個(gè)氨基組成的活細(xì)胞,藉由刺激表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體之酪氨酸磷酸化,達(dá)到修補(bǔ)增生肌膚表層細(xì)胞,據(jù)說(shuō)對(duì)受傷、受損之表皮肌膚擁有很好的療效,其較大特點(diǎn)是能夠促進(jìn)細(xì)胞的增殖分化。所以加入它們都是促進(jìn)細(xì)胞增殖的。心浸液瓊脂(強(qiáng)化配方)HIA培養(yǎng)基人工合成基因可以在特定的培養(yǎng)基中得到表達(dá),需要選擇含有適當(dāng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基。
培養(yǎng)基有天然、人工兩種。一般實(shí)驗(yàn)室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基,以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)調(diào)pH至7.2-7.4,若pH值超過(guò)7.6或遠(yuǎn)低于6.8,則大多數(shù)細(xì)胞不能生長(zhǎng)。RPMI-1640不耐高壓滅菌,使用前需經(jīng)滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過(guò)處理。培養(yǎng)中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高壓滅菌,無(wú)菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補(bǔ)體,置4℃冰箱存放待用。配制時(shí)含量視培養(yǎng)細(xì)胞種類、時(shí)間而定,一般用10—15%。由于血清成分復(fù)雜、條件不易控制,可選用無(wú)血清培養(yǎng)基。
長(zhǎng)時(shí)間高溫還會(huì)引起磷酸鹽、碳酸鹽與某些陽(yáng)離子(特別是鈣、鎂、鐵離子)結(jié)合形成難溶性復(fù)合物而產(chǎn)生沉淀,因此,在配制用于觀察和定量測(cè)定微生物生長(zhǎng)狀況的合成培養(yǎng)基時(shí),常需在培養(yǎng)基中加入少量螯合劑,避免培養(yǎng)基中產(chǎn)生沉淀,常用的螯合劑為乙二胺四乙酸(EDTA)。還可以將含鈣、鎂、鐵等離子的成分與磷酸鹽、碳酸鹽分別進(jìn)行滅菌,然后再混合,避免形成沉淀;高壓蒸汽滅菌后,培養(yǎng)基pH會(huì)發(fā)生改變(一般使pH降低),可根據(jù)所培養(yǎng)微生物的要求,在培養(yǎng)基滅菌前后加以調(diào)整。固體培養(yǎng)基則通過(guò)向液態(tài)培養(yǎng)基中加入凝膠劑來(lái)制成,以便在培養(yǎng)過(guò)程中提供可視化定位細(xì)胞的單元。
培養(yǎng)基按成分分類有哪些?上海瑞楚生物科技有限公司小編介紹,根據(jù)培養(yǎng)基的組成成分,可分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基兩大類。天然培養(yǎng)基(native medium) 含有不完全明了化學(xué)成分的天然物質(zhì)。如蛋白胨、牛肉膏(粉)、肉浸液、玉米漿、血液、馬鈴薯等。用此類材料配成的培養(yǎng)基很難做到不同批號(hào)之間質(zhì)量的穩(wěn)定一致,因此在選用原料時(shí)務(wù)必注明其商品名稱、生產(chǎn)廠家及批號(hào),對(duì)不同來(lái)源的原料應(yīng)先做小樣試驗(yàn)。此種培養(yǎng)基成本較低,細(xì)菌繁殖較好,一般細(xì)菌培養(yǎng)以選用天然培養(yǎng)基為主。培養(yǎng)基可以分為有機(jī)培養(yǎng)基和無(wú)機(jī)培養(yǎng)基兩類。心浸液瓊脂(強(qiáng)化配方)HIA培養(yǎng)基
如果細(xì)菌的生長(zhǎng)受到限制,可以嘗試調(diào)整培養(yǎng)基的成分或添加輔助物質(zhì),例如控制培養(yǎng)基中氧氣的含量。心浸液瓊脂(強(qiáng)化配方)HIA培養(yǎng)基
要獲得微生物純培養(yǎng),必須避免雜菌污染,因此對(duì)所用器材及工作場(chǎng)所進(jìn)行消毒與滅菌。對(duì)培養(yǎng)基而言,更是要進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌。對(duì)培養(yǎng)基一般采取高壓蒸汽滅菌,一般培養(yǎng)基用1.05kg/cm2,121.3℃條件下維持15-30min可達(dá)到滅菌目的。在高壓蒸汽滅菌過(guò)程中,長(zhǎng)時(shí)間高溫會(huì)使某些不耐熱物質(zhì)遭到破壞,如使糖類物質(zhì)形成氨基糖、焦糖,因此含糖培養(yǎng)基常在0.56kg/cm2,112.6℃15-30分鐘進(jìn)行滅菌,某些對(duì)糖類要求較高的培養(yǎng)基,可先將糖進(jìn)行過(guò)濾除菌或間歇滅菌,再與其他已滅菌的成分混合。心浸液瓊脂(強(qiáng)化配方)HIA培養(yǎng)基
上海瑞楚生物科技有限公司成立于2012-11-29,同時(shí)啟動(dòng)了以瑞楚生物為主的培養(yǎng)基,菌種,標(biāo)準(zhǔn)品,酶產(chǎn)業(yè)布局。是具有一定實(shí)力的化工企業(yè)之一,主要提供培養(yǎng)基,菌種,標(biāo)準(zhǔn)品,酶等領(lǐng)域內(nèi)的產(chǎn)品或服務(wù)。同時(shí),企業(yè)針對(duì)用戶,在培養(yǎng)基,菌種,標(biāo)準(zhǔn)品,酶等幾大領(lǐng)域,提供更多、更豐富的化工產(chǎn)品,進(jìn)一步為全國(guó)更多單位和企業(yè)提供更具針對(duì)性的化工服務(wù)。瑞楚生物始終保持在化工領(lǐng)域優(yōu)先的前提下,不斷優(yōu)化業(yè)務(wù)結(jié)構(gòu)。在培養(yǎng)基,菌種,標(biāo)準(zhǔn)品,酶等領(lǐng)域承攬了一大批高精尖項(xiàng)目,積極為更多化工企業(yè)提供服務(wù)。