內生菌共生于植物內部,要獲得內生菌首先需要破碎植物組織。植物組織和內生菌在形態、硬度等性質上均有差異,想要獲得更多內生菌基因組DNA,對裂解介質的選擇是難點。2、相對于植物基因組,雖然內生菌包括細菌,***,放線菌等不同類型微生物,但其基因組*占微小部分單獨提取內生菌DNA比較困難,提取到的是混合DNA,通過PCR才能鑒定。內生菌DNA提取思路:STEP1破壞植物釋放菌體;STEP2破壞菌體釋放核酸;STEP3提取DNA。有沒有合適的益啟生物是土壤DNA提取的代理商。寶山區FastDNA Spin Kit For Soil土壤DNA提取報價
12000rpm離心1分鐘;倒棄收集管中廢液,加入500 ul漂洗液,12000rpm離心1分鐘;倒棄收集管中廢液,加入500 ul漂洗液,12000rpm離心1分鐘;倒棄收集管中廢液,12000rpm離心3分鐘,將離心柱轉移至新的離心管中,70℃加熱3分鐘;加入20 ul洗脫液,70℃加熱3分鐘;12000rpm離心1分鐘,丟棄離心柱,離心管中液體即為DNA溶液。 2)PCR擴增及電泳 PCR擴增使用Identifiler Plus試劑盒,10 μl擴增體系中含4 μl master mix、2 μl primer set、4 μl模板,擴增程序為,95℃,11分鐘;94℃,20 秒,59℃,3分鐘,30個循環;60℃,10分鐘;4℃保存;電泳在ABI 3500XL儀器中進行;電泳上樣體系為,1 μl PCR產物,9 μl甲酰胺,其中已加Liz。 實施例4 以石英膜提取土壤尿液DNA 1)DNA提取 刮取含有尿液的表層土壤,烘干,土壤DNA土壤DNA提取訂購土壤DNA提取上海授權代理商——上海益啟生物科技有限公司。
les using SPINeasy DNA Kit for Soil:M: 1kb plus DNA ladder、Lane 1: Organic soil、Lane 2: Paddy soil、Lane 3: Flowerbed soil、Lane 4: Saline soil 、L ane 5: Desert soil。結論:采用SPINeasy DNA Kit for Soil提取多種類型土壤基因組DNA,電泳條帶清晰,無彌散。3.提取不同類型土壤基因組DNA進行PCR結果。Figure 2: PCR amplification of 16S rRNA gene from different soil samples using SPINeasy DNA Kit for Soil:Lane 1: Organic soil、Lane 2: Paddy soil、M: 1kb plus DN
94℃,20 秒,59℃,3分鐘,30個循環;60℃,10分鐘;4℃保存;電泳在ABI 3500XL儀器中進行;電泳上樣體系為,1 μl PCR產物,9 μl甲酰胺,其中已加Liz。 實施例5 以二氧化硅包裹的磁性納米顆粒提取土壤尿液DNA 1)DNA提取 刮取含有尿液的表層土壤,烘干,取100-200 mg土壤樣品,加入樣品管中,然后加入400 ul土壤裂解液和20 ul 蛋白酶k,震蕩混勻后,75℃加熱裂解15分鐘;最大轉速離心5分鐘,將上清液轉移至新的樣品管中,加入800 ul結合液,混勻;混合液轉移至裝有15 ul二氧化硅包裹的磁性納米顆粒的離心管中,混勻后靜止15分鐘;上磁力架吸附2分鐘,吸棄上清液;加入500 ul漂洗液,混勻,上磁力架吸附1分鐘,吸棄上清;上海益啟生物的土壤DNA提取詢價公司電話。
1.0視為提取效果良好。土壤類型:有機營養土100mg、花壇土100mg、鹽堿土250mg、沙漠土250mg。提取方法:自動化/手工、自動化/手工、自動化/手工、自動化/手工。DNA收率(ng/mg樣本):130.25+4.95;196.08+3.92、19.92+0.95;24.43+0.74、11.75+0.37;13.43+0.39、2.47+0.13;2.97+0.13。A260/A280:1.84+0.00;1.98+0.02、1.86+0.01;1.85+0.02、1.87+0.02;1.90+0.01、1.85士0.00;1.91+0.03。A260/A230:1.23+0.02;1.08+0.01、1在線詢問土壤DNA提取價格,規格。金山區土壤微生物DNA土壤DNA提取商家
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樣本,5-6m/s,研磨20-40s,難裂解樣本研磨2個循環,增加研磨力度,提取按土壤試劑盒提取protocol進行?!ぽ^軟的樣本,仍然可以采用介質E,提高裂解的劇烈程度,增加研磨速度和時間,增加研磨次數。不僅如此,我們還有文獻支持。參考文獻1:·樣本類型:葡萄枝·樣本粉碎:使用液氮和攪拌機將植物材料在無菌鋼瓶中粉碎?!颖玖呀猓篎astPrep-24TM 5G,介質E裂解?!颖綝NA提?。篎astDNA Spin Kit for Soil提取。·下游實驗:細菌16S rD寶山區FastDNA Spin Kit For Soil土壤DNA提取報價