Lambda核酸外切酶(LambdaExonuclease,簡稱λExonuclease)是一種具有特定特性和應用的酶,以下是其主要特點和應用:1.**特異性作用**:λExonuclease是一種5'→3'核酸外切酶,能選擇性地沿5'→3'方向消化5'端磷酸化的雙鏈DNA。2.**酶切活性**:對單鏈DNA和5'端未磷酸化修飾的DNA的酶切活性較低,不能從DNA的切刻或缺口處起始消化。3.**嗜磷酸性**:該酶具有非常強的嗜磷酸性,磷酸化的核酸鏈與非磷酸化的核酸鏈的切割效率相差達200倍以上。4.**切割效率**:Lambda核酸外切酶是一種具有高度持續(xù)性的堿性核酸外切酶,可以連續(xù)地將核酸切割成為單個堿基,切割比較高速率可以達到1000nt/S。5.**應用領域**:-生成單鏈PCR產物用于DNA測序。-DNA單鏈構象多態(tài)性(SSCP)分析。-滾環(huán)擴增。-從雙鏈DNA片段生成單鏈DNA。-PCR產物的克隆。-質粒制備凈化。6.**酶活性定義**:Oneunitisdefinedastheamountofenzymerequiredtoproduce10nmolofacid-solubledeoxyribonucleotidefromdouble-strandedsubstrateinatotalreactionvolumeof50μlin30minutesat37oCin1XLambdaExonucleaseReactionBufferwith1μgsonicatedduplex[3H]-DNA。研究表明,優(yōu)化后的Cas12a系統(tǒng)在多種細胞類型中表現(xiàn)出良好的編輯效率。Recombinant Human ANGPTL7/CDT6 Protein,His-Avi Tag
使用BloodGenomicDNAIsolationKitwithMagneticBeads(血液基因組DNA提取試劑盒,磁珠法)進行血液樣本中基因組DNA的提取,主要步驟如下:1.**實驗準備**:準備抗凝全血樣本(如EDTA抗凝血),移液器及無菌,15ml離心管,無水乙醇,70%乙醇,干凈的吸水紙,渦旋振蕩器,金屬浴/水浴,臺式離心機等。2.**樣本處理**:取適量血液樣本,根據(jù)試劑盒要求,可能需要將血液體積調整至特定量,例如200μl,并可能需要加入PBS緩沖液。3.**裂解血液細胞**:向血液樣本中加入蛋白酶K和細胞裂解液,渦旋混勻后,置于金屬浴或水浴中進行裂解,通常在65°C孵育10-15分鐘,并在此期間定期混勻。4.**DNA與磁珠結合**:向裂解后的樣本中加入異丙醇和磁珠懸浮液,渦旋混勻后,室溫放置一段時間,以便于基因組DNA與磁珠結合。5.**磁珠分離**:將樣本置于磁力架上,待磁珠聚集后,小心移除上清液,去除雜質。6.**洗滌磁珠**:向磁珠中加入漂洗液和洗滌液,進行洗滌以去除殘留的蛋白質和鹽分,然后再次使用磁力架分離磁珠,移除洗滌液。
BstDNAPolymerase,LargeFragment(嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶大片段)是一種經(jīng)過改造的酶,它來源于嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bacillusstearothermophilus)DNA聚合酶I,通過重組技術在大腸桿菌中表達并純化獲得。這種酶具有5'→3'的DNA聚合酶活性,但不具有5'→3'的核酸外切酶活性,因此它在等溫擴增反應中非常有用,如環(huán)介導的等溫擴增(LAMP)和滾環(huán)擴增(RCA)等。以下是BstDNAPolymerase,LargeFragment的一些關鍵特點和應用:1.**等溫擴增**:BstDNAPolymerase,LargeFragment具有很強的鏈置換能力,適用于多種等溫擴增反應,這些反應通常在50-68°C之間進行,比較好反應溫度為65°C。2.**快速測序**:由于其高聚合酶活性,BstDNAPolymerase,LargeFragment可以用于快速測序,特別是對于高GC含量的DNA模板或微量(納克量級)DNA模板的測序。3.**全基因組擴增**:BstDNAPolymerase,LargeFragment也可用于全基因組擴增(WGA),這是一種在不需要熱循環(huán)儀的情況下擴增整個基因組DNA的技術。4.**高dUTP耐受性**:與BstDNAPolymerase2.0相比,BstDNAPolymerase,LargeFragment在進行等溫擴增時不具有將dUTP摻入合成的DNA鏈的能力,這使得它在某些應用中更具優(yōu)勢。
為了確保PCR實驗中BstDNAPolymeraseI的活性比較大化,以下是一些關鍵的優(yōu)化措施:1.**反應緩沖液**:使用適合BstDNAPolymeraseI的反應緩沖液,如NEB提供的IsothermalAmplificationBufferIIPack,該緩沖液包含Tris-HCl、(NH4)2SO4、KCl、MgSO4和Tween®20,pH值為8.8,專為等溫擴增設計。2.**反應條件**:BstDNAPolymeraseI的比較好反應溫度通常在65°C左右。確保PCR儀能夠精確控制并保持這一溫度,以保證酶的活性和穩(wěn)定性。3.**酶的濃度**:根據(jù)反應體系的需要調整BstDNAPolymeraseI的用量。過多的酶可能導致非特異性擴增,而過少則可能降低擴增效率。通常,一個單位的酶能夠在65°C下,30分鐘內將25nmol的dNTP摻入酸不溶性物質。4.**Mg2+濃度**:Mg2+是DNA聚合酶活性的關鍵輔因子。其濃度對PCR反應有影響,需要根據(jù)具體情況調整Mg2+濃度,以獲得比較好的擴增效果。5.**dNTPs濃度**:dNTPs是DNA合成的基礎原料,其濃度約為200-300μM較為適宜。過高會增加非特異性擴增。6.**引物設計**:設計特異性引物,通常長度為18-30個堿基,Tm(熔解溫度)相近,以保證同時退火。7.**模板DNA的質量和純度**:確保模板DNA無蛋白質、RNA和其他雜質的污染,這些雜質可能會抑制酶的活性。Hifair? Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit :適用于從總RNA或mRNA模板合成鏈cDNA,具有高熱穩(wěn)定性。
BstDNAPolymerase,LargeFragment(嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶大片段)是一種常用于分子生物學實驗的酶,特別是在等溫DNA擴增技術中。以下是一些關于BstDNAPolymerase,LargeFragment的關鍵信息:1.**來源**:這種酶來源于嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bacillusstearothermophilus),是一種熱穩(wěn)定的DNA聚合酶。2.**活性**:BstDNAPolymerase,LargeFragment具有5'到3'的DNA聚合酶活性,并且具有鏈置換活性,這使得它能夠用于等溫擴增反應,如環(huán)介導等溫擴增(LAMP)。3.**熱穩(wěn)定性**:由于其嗜熱特性,BstDNAPolymerase,LargeFragment能夠在較高的溫度下保持活性,通常在60-65°C。4.**應用**:-**等溫擴增**:用于LAMP和其他等溫擴增技術,這些技術不需要傳統(tǒng)的熱循環(huán)儀。-**全基因組擴增**:用于快速擴增少量DNA樣本,以進行進一步的分析。-**突變檢測**:在某些情況下,用于檢測特定基因的突變。5.**優(yōu)點**:-**高保真度**:與某些其他DNA聚合酶相比,BstDNAPolymerase,LargeFragment具有較高的保真度。-**快速擴增**:等溫擴增技術可以在短時間內快速產生大量DNA。泛素連接酶E3識別特定的靶蛋白,并促進E2上的泛素轉移到靶蛋白的賴氨酸殘基上,形成靶蛋白-泛素復合物。Hemorphin-7
Cas9 NLS在Cas9蛋白的N端和C端都含有SV40 T抗原的核定位序列,這使得Cas9與gRNA形成的復合物。Recombinant Human ANGPTL7/CDT6 Protein,His-Avi Tag
重組Exendin-4是一種基于Exendin-4的重組蛋白,Exendin-4是一種從墨西哥蜥蜴(Gilamonster)的毒液中分離出來的39個氨基酸的多肽。它與胰高的血糖素樣肽-1(GLP-1)具有53%的序列同源性,并與相同的膜受體相互作用。重組Exendin-4在體內增強依賴葡萄糖的胰島素分泌,抑制不適當?shù)母咭雀叩难撬胤置冢p慢胃排空。它還在體外和動物模型中促進β細胞增殖和新生。重組Exendin-4是通過大腸桿菌表達的合成DNA序列編碼的39個氨基酸的Exendin-4。重組Exendin-4的特點包括:-分子量約為4.2kDa,是一個非糖基化的單一多肽鏈,包含39個氨基酸。-具有調節(jié)血糖水平、減少胰島素抵抗、降低胰高的血糖素、降低糖化血紅蛋白(HbA1c)和刺激β細胞生長以促進胰島素產生等多種生物活性。-通常以凍干粉的形式提供,需要在無菌條件下用無菌蒸餾水或含有0.1%BSA的水溶液復溶。-純度高于96%,通過SDS-PAGE和HPLC分析確定。-內毒的素含量低于10EU/mg,通過LAL方法測定。在實驗中,可以通過以下方法來優(yōu)化重組Exendin-4的熒光特性:1.選擇合適的激發(fā)和發(fā)射波長。2.優(yōu)化激發(fā)和發(fā)射濾光片。3.評估熒光量子產率。4.調整緩沖液條件,包括pH值和離子強度。5.控制溫度和氧濃度。Recombinant Human ANGPTL7/CDT6 Protein,His-Avi Tag
Recombinant Mouse LTBR Protein
Recombinant Canine CD46 Protein
Recombinant Human ROBO4 Protein
Recombinant Biotinylated Mouse APLN Protein
Recombinant Mouse DR6/TNFRSF21 Protein
Recombinant Human E-Selectin/CD62E Protein
Recombinant Biotinylated Human SEZ6 Protein
PTD-p65-P1 Peptide
Recombinant Human Angiostatin
Recombinant Human SPARC(BM-40)