膠原蛋白的功效與作用：可以預防心血管病。研究表明，膠原蛋白可以降低血甘油三酯和膽固醇，并可增高體內某些缺乏的必需微量元素，從而使其維持在一個相對正常的范圍之內，是一種理想的降血脂食品。此外，膠原蛋白在協助機體排出鋁質，減少鋁質在體內聚集方面也有獨特之處。鋁對人體有害，研究表明，日前逐漸增多的老年癡呆癥與鋁的攝入量有關，同時膠原蛋白有加速血紅蛋白和紅細胞生成的功效，它具有改善循環、對、缺血性腦病有利。膠原蛋白是脊椎動物和無脊椎動物支持結構的主要組成。廈門正規鼠尾膠原廠家現貨

詳細步驟如下：1.75％酒精浸泡大鼠尾巴30min；2.將尾巴剪開、去掉皮毛，并剪成小段（3cm左右），抽出銀色的尾鍵；3.把剪碎的尾鍵置于150ml，0.1％消過毒的醋酸中，4℃放置，并不時振蕩；4.48h后取上清，4000轉離心30min后，取上清；5.分裝上清（鼠尾膠）4度（或-20度）保存。有時可繼續向4。中沉淀中加入10－20ml醋酸，重復以上步驟，以制備更多的鼠尾膠。在使用時，先將冰存的膠原液在室溫下解凍，再按以下步驟包被培養器皿：1）用吸管吸取膠原液，在無菌的培養器皿的生長面內壁上均勻地涂上薄薄的一層膠原溶液。2）若包被的是培養瓶，可向培養瓶通入氨氣或用浸有氨水的棉球封口片刻。讓氨氣充入瓶內后，即可旋緊瓶蓋或塞緊瓶塞。若為培養皿或板的話，可將培養皿或板放在已消毒的飯盒內，將浸有氨水的棉球放入飯盒內，蓋緊飯盒蓋，四周用封口膠封死。廈門正規鼠尾膠原廠家現貨膠原的立體結構與一般的球狀蛋白質完全不同，每一條亞基形成一股左手旋轉的螺旋。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：將培養器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后，轉移到培養箱內。如果配制中使用的是10PBS，使用前需要加入適當體積的細胞培養液預平衡。B．含細胞的三維膠原的制備（以配制200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結），立即混勻。再加入23ul10PBS10培養液，混勻(混勻后pH左右，如果PBS或培養液中沒有加酚紅，初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細胞懸浮液，混勻后立即加到培養器皿中。將培養器皿在室溫下放20分鐘待膠凝固后，加入適當體積的細胞培養液，轉移到培養箱中培養。注意事項：在室溫下pH中性時可迅速成膠，在操作過程中要盡量保持低溫。

三維膠原的制備：鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上，pH7左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中，在成膠過程中需要加入0.06X體積的0.1mol/LNaOH來中和。需要的溶液(均需要無菌、預冷):10xPBS(可含10mg/L的酚紅用于pH指示)或10x培養液,0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),雙蒸水A．不含細胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入690ulH2O。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結），立即混勻。鼠尾型膠原構建與人類自體骨組織化學成分和分子結構相近的仿生骨材料。

實驗應用：鼠尾膠原在原代培養耳蝸血管紋邊緣細胞中的應用。目的：建立利用自制的鼠尾膠原培養大鼠耳蝸邊緣細胞的方法。方法:制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養出大鼠耳蝸邊緣細胞的效果。結果：自制的鼠尾膠原能正常地培養出大鼠耳蝸邊緣細胞，細胞角蛋白18表達陽性，免疫組織化學結果和掃描電鏡證實所培養的細胞具有典型的分泌上皮細胞特征。結論：成功建立了利用自制鼠尾膠原培養大鼠耳蝸邊緣細胞的方法，并且制作簡便,成本低廉。按照6-10ug/cm2的濃度包被培養瓶。在室溫或37度結合數小時或者2-8度過夜。廈門正規鼠尾膠原廠家現貨

鼠尾膠原醋酸溶解：稀釋一定數量的膠原溶液。廈門正規鼠尾膠原廠家現貨

鼠尾膠原的生物礦化和TEM觀察：果凍樣Ⅰ型膠原蛋白膠體初始浸泡在礦化液中時呈微白色；礦化2d后，膠體的顏色逐漸加深至乳白色；礦化6d后，隨著羥基磷灰石晶體礦化長入膠原纖維內部，膠體顏色加深至純白色，并在膠體表面沉積了一層薄薄的羥基磷灰石鈣晶體，予鑷子夾起，其表層羥基磷灰石鈣晶體破碎散落。TEM表征顯示：礦化2d后，Ⅰ型膠原纖維的明暗相隔周期性條紋結構逐漸模糊，羥基磷灰石鈣前體滲入膠原纖維內部，膠原纖維部分礦化，沿著膠原纖維生長，忖度變深；礦化6d后，Ⅰ型膠原纖維的明暗相隔D-Band結構完全消失，膠原纖維內部可以看到黑色羥基磷灰石晶體，嵌入膠原纖維縱向生長。當鼠尾Ⅰ型膠原纖維完全礦化時，由于整條膠原纖維都被羥基磷灰石鈣晶體占據，膠原纖維呈現黑色，選區衍射斑圖符合羥基磷灰石表征。廈門正規鼠尾膠原廠家現貨

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