外泌體是各種細胞外泌的直徑在30-100nm之間的膜囊泡。因外泌體內含mRNA、microRNA等核酸和蛋白質對相鄰細胞具有交換信息的功能。作為細胞間信號傳導的通訊工具和作為病等各種疾病的生物標記話題比較熱門。近些年關于外泌體研究很普遍,但是關于外泌體相關的實驗技術,關于需要改進的課題存在很多。例如,外泌體提純方法中,超速離心法和聚合物沉淀法(市售試劑盒)混入多種雜質,給后續實驗產生了許多障礙。抗體親和法和密度梯度離心法,雖然可以提取到高純度的外泌體,但不能提取完整外泌體,無法分析外泌體具有的生理功能,也是兩種提取方法的問題所在。而免疫印跡法(WB)和Elisa檢測法作為被普遍應用的外泌體檢測的一般方法,又存在檢測時需使用大量外泌體和難以檢測到低表達水平的標記蛋白。通過壓制或去除這些外泌體,有希望壓制疾病發生。細胞工程外泌體
外泌體(exosome)是多種活細胞經過“內吞–融合–外排”等一系列過程主動向胞外分泌的直徑為30~150nm的雙層膜結構細胞外囊泡(extracellularvesicles,EVs),廣fan存在于血液、尿液和唾液等生物體液中,并通常作為細胞間胞質蛋白、核酸和脂質的轉移載體發揮運輸調控作用,被認為是細胞間通訊的核xin部分。外泌體于1983年在HARDING等和PAN等研究羊網織紅細胞分化的過程中被發現,并于1996年由RAPOSO等證實能夠作為一種細胞間通訊結構在免疫系統中發揮作用后得到了廣fan關注。近年來,隨著外泌體在中流、心血管和感ran性疾病等多種疾病形成中的生物學作用和功能被逐漸揭示,尤其是2015年MELO等發現,外泌體Glypican-1蛋白可有效區分慢性胰腺炎與胰腺ai以來,外泌體作為疾病診斷、預后預測標志物以及藥物靶向zhiliao載體的轉化醫學應用也得到了迅速的推進。細胞工程外泌體干細胞外泌體通過改變細胞外基質,改變受體細胞的轉錄組和蛋白質組,調節細胞凋亡,生長,增殖和分化途徑。
外泌體的提取方法:超速離心法,這是外泌體提取比較常用的方法。超速離心法得到的外泌的體量比較多,但是純度不足,電鏡鑒定時發現外泌體聚集成塊,由于微泡和外泌體沒有非常統一的鑒定標準,也有一些研究認為此種方法得到的是微泡而不是外泌體。過濾離心法,這種操作簡單、省時,不會影響外泌體的生物活性,但同樣存在純度不足的問題。密度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高,但是前期的準備工作繁雜,比較耗時,量少。
外泌體普遍參與細胞間物質運輸與信息傳遞,調控細胞生理活動。同時,外泌體具有抗原提呈、免疫逃逸、誘導正常細胞轉化、促進種瘤發生和轉移等作用;此外,外泌體還可以作為“天然的納米粒子”來進行藥物遞送。外泌體相關數據庫有哪些?lexoRBase數據庫收集和描述人類血液外泌體中所有長的RNA,包括circRNA、lncRNA和mRNA。lEVpedia和Vesiclepedia數據庫匯總了不同囊泡研究中發現的蛋白、mRNA、miRNA、脂類等信息。lExoCarta數據庫主要收錄了包括人、大鼠、小鼠、綿羊等幾個物種的286個研究結果,涉及蛋白、mRNA、miRNA、脂類等信息。外泌體是各種細胞外泌的直徑在30-100nm之間的膜囊泡。外泌體具有良好的生物兼容性、穩定性和內在靶向性,使其在藥物遞送方向大有潛力。
人體內多種細胞及體液均可分泌外泌體,包括內皮細胞、免疫細胞、血小板、平滑肌細胞等。當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時,外泌體可通過其攜帶的蛋白質、核酸、脂類等來調節受體細胞的生物學活性。外泌體介導的細胞間通訊主要通過以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結合,進而喚醒靶細胞細胞內的信號通路。二是在細胞外基質中,外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結合,從而喚醒細胞內的信號通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合,非選擇性的釋放其所含的蛋白質、mRNA以及microRNA。細胞表面受體表達不同,外泌體對受體細胞的影響可能不同,可能誘導細胞存活,也可能誘導凋亡或免疫調節等。細胞工程外泌體
干細胞外泌體對多種類型的免疫細胞均具有免疫調節作用。細胞工程外泌體
外泌體是新型治理劑,惡性瘤細胞往往能夠通過分泌大量外泌體抑制宿主固有免疫。對外泌體的質譜研究發現,惡性瘤細胞的外泌體含有大量活化型的表皮生長因子受體(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR),可以抑制宿主細胞α型干擾素(IFN-α)的產生。這就解釋了為什么部分瘤患者固有免疫低下,也為晚期病癥患者的治理提供一個新的策略和理論依據。除了瘤,外泌體在其他疾病如心血管疾病等的診斷和治理的相關臨床試驗也在世界范圍內開展中。細胞工程外泌體