一提起蛋白質濃縮、更換緩沖液,我們都會想起超濾。這是一種我們都很熟悉的膜分離技術。它可用來分離溶液中極小的顆粒和溶解的分子。這種方法的較大特點是操作簡便,只需要濃縮離心管和離心機,即可圓滿完成我們的任務。與層析、透析等方法相比,超濾對被處理的分子更加溫和。它不需要有機萃取,就不會導致蛋白變性。這種方法非常高效,可同時濃縮和純化分子。操作可在低溫(比如冷庫)下進行。另外,快速、便宜,也是許多人青睞它的原因。濃縮離心管的操作很簡單。選擇適當的濃縮離心管,加入待處理的樣本,按照離心管的指示進行離心操作,之后回收截留的樣本。在離心力的作用下,溶液中的小分子溶質和溶劑透過超濾膜,被收集在濾過液收集瓶中,而大分子溶質被超濾膜截留在濃縮離心管中。這種分離的主要依據是分子大小,但分子形狀和電荷等其他因素也會有影響。超濾離心管是一種經濟、有效且環保的分離技術,具有普遍應用前景。北京超濾離心管生產商
超濾離心管,備有四種材質的超濾膜:聚醚砜、三醋酸纖維素、再生纖維素和Hydrosart,可根據不同要求靈活選用;兩種回收濃縮液的方法:既可用吸管直接吸取并回收,又可將離心管放入離心機反甩,將濃縮液甩入回收帽中,加蓋保存。這兩種方法都可使濃縮液達到近乎完全回收;截留分子量普遍,配有3K、5K、10k、30K、50K、100K、300K、1000K、0.2μl的聚醚砜膜;新推出產品膜2K型,具有極低的蛋白吸附特性,高流速、高通量,是免疫球蛋白濃縮和脫鹽的理想用膜。用以濃縮蛋白,如果要換Buffer,在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候,輕輕加入新的Buffer(經0.22um超濾膜超濾),再 濃縮至1ml左右,連續三次,之后一次的濃縮終體積根據需要的蛋白濃度而定,一般不多于500ul,也有濃縮至200ul以內的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算,三次達到1000倍以上,基本上可以達到換buffer的目的。北京超濾離心管生產商使用超濾離心管時應注意避免過度旋轉造成樣品變性或降解,并影響后續實驗結果。
超濾離心管的原理:根據標稱分子量限值(NMWL)的不同,典型處理時間為10-30分鐘。超濾膜的垂直設計也較大程度降低了溶質極化造成的濾膜結垢;Chemicalbook死體積設計能有效防止過度離心使樣本干掉而造成樣本損失。收集濾出液后,濃縮樣本(截留部分)可通過一個簡便的倒置(上下反轉)離心步驟而實現高效回收。超濾離心管的應用:1)濃縮含有抗原、抗體、酶、核酸(DNA/RNA樣本,單鏈或雙鏈)、噬菌體等微生物樣本2)純化組織培養提取液或細胞裂解液中的大分子成分,去除反應液中的引物、接頭或分子標記,在HPLC前去除蛋白質。3)除鹽,緩沖液更換,或滲濾。
超濾離心管使用的是再生纖維素膜,這種材質是蛋白吸附較低的超濾膜。但是對于一些疏水性蛋白或非極性蛋白,它們和膜的非特異吸附可能會增強,對于這種情況,可以嘗試在實驗前對超濾管進行封閉處理,也可以嘗試換成Amicon Ultra0.5或2來進行實驗,通過減小膜面積來降低非特異性吸附。超濾膜含有微量甘油。如果此成分干擾分析,可用緩沖液或Milli-Q水預清洗。如果干擾仍存在,用0.1N NaOH清洗,然后用緩沖液或Milli-Q水再次清洗后甩干。超濾離心管還可用于檢測藥品樣品中的殘留物和污染物,并進行質量監測和控制。
A(聚酰胺):這種材質是PP和PE材質的聚合物,半透明,化學性質非常穩定,單不耐高溫。PF(聚氟):半透明,可以低溫使用,如果是-100℃-140℃下的實驗環境,就可以用這種材質的離心管。CAB(醋酸丁酯纖維素):透明,可用于較稀的酸、堿、鹽,以及酒精、蔗糖的梯度測定。PS(聚苯乙烯):透明,硬度大,對大多數的水溶液穩定,但是會被多種有機物腐蝕,多用于低速離心,而且一般是一次性使用。離心管分類:按材質可分:塑料離心管、玻璃離心管和不銹鋼離心管等。按速度可分:低速離心管和高速離心管。按容量可分:微量離心管、小容量離心管和大容量離心管。一般稱容量大于100mL的離心管為離心瓶。超濾離心管可以用于制備疫苗、抗體等生物制品,以緩解某些疾病。北京超濾離心管生產商
超濾離心管可以有效地去除混合物中的低分子量化合物,從而提高目標化合物的純度。北京超濾離心管生產商
超濾離心管是內部裝有超濾膜的用于濃縮和凈化生物樣本的一次性耗材。15ML的超濾離心管可處理樣品量達20ML,具有快速超過濾功能,能夠達到較高的濃縮系數,易于從稀釋液和復雜的樣本組合進行濃縮液回收。豎式設計以及其雙面的超大過濾面積能提供快速的樣本處理和較高的樣本回收率(通常大于90%稀薄的初始溶液),并能進行80倍濃縮。典型的處理時間為15至40分鐘。豎式設計將溶質極化和之后造成的濾膜結垢降至低,過濾裝置中的物理止濾點防止過濾器旋轉過度使樣本干燥和造成樣本損失。濃縮液用移液管從過濾器的樣本槽中收集,而超過濾濾出液則收集到所提供的離心管中。該裝置可在擺桶或定角轉子中旋轉。的離心管有超過7種不同的截留分子量(截留分子量,MWCO)3Kda,5Kda,10Kda,30Kda,50Kda,100Kda,500Kda等。北京超濾離心管生產商
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