外泌體(exosome)是多種活細胞經過“內吞–融合–外排”等一系列過程主動向胞外分泌的直徑為30~150nm的雙層膜結構細胞外囊泡(extracellularvesicles,EVs),廣fan存在于血液、尿液和唾液等生物體液中,并通常作為細胞間胞質蛋白、核酸和脂質的轉移載體發揮運輸調控作用,被認為是細胞間通訊的核xin部分。外泌體于1983年在HARDING等和PAN等研究羊網織紅細胞分化的過程中被發現,并于1996年由RAPOSO等證實能夠作為一種細胞間通訊結構在免疫系統中發揮作用后得到了廣fan關注。近年來,隨著外泌體在中流、心血管和感ran性疾病等多種疾病形成中的生物學作用和功能被逐漸揭示,尤其是2015年MELO等發現,外泌體Glypican-1蛋白可有效區分慢性胰腺炎與胰腺ai以來,外泌體作為疾病診斷、預后預測標志物以及藥物靶向zhiliao載體的轉化醫學應用也得到了迅速的推進。外泌體由于包含的內容物具有明顯的組織特異性,為其能成為瘤早期診斷的生物標志物提供了重要保障。廣州外泌體iTRAQ
Vlassov等人發表的一篇外泌體的提取方法及組成的專利文獻中介紹,通過終濃度為8%的PEG6000與生物體液共孵育14h后,10000xg離心1h,可將直徑在30-150nm之間,且包含豐富RNA的外泌體沉淀下來。因此采用終濃度為8%的PEG6000沉淀血清中的外泌體,為了進一步純化胎盤相關外泌體,將獲得的包含外泌體的沉淀用PBS重新懸浮后,加入非線性蔗糖密度梯度層,10000xg超速離心5h,將分層液采用PEG6000進行2次沉淀。經過多次實驗反復驗證,確定同時表達外泌體標志蛋白分子及胎盤特異性蛋白分子的胎盤來源外泌體所在密度層。廣州外泌體iTRAQ從體液和培養上清中高純度提取的高純度外泌體,在活內是否真的能發生作用尚未能確定。
外泌體是新型治理劑,瘤轉移是一個包括病細胞侵入、血管中存活和殖民化等多步驟的復雜過程。外泌體能夠影響這個級聯反應的每一步,因此可作為瘤治理的靶點。瘤細胞在轉移到其他組織時需要在間質細胞間移動并到達血管中,在這個過程中,瘤細胞外泌體通過纖維連接蛋白促進瘤細胞的運動性,再通過蛋白酶促進細胞外基質的分解、血管生成,進而促進瘤轉移。多數瘤細胞對轉移的組織具有指向性,而外泌體表面的整合素就是決定其指向性的因子,如外泌體αvβ5整合素決定了對肝臟的指向性,而外泌體α6β4?α6β1整合素決定了對肺部的指向性。
外泌體特指直徑在30-150nm的囊泡,其主要來源于細胞內多囊泡體,經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中。外泌體膜上富含參與外泌體運輸的四跨膜蛋白家族(CD63,CD81和CD9)、熱休克蛋白家族(HSP60,HSP70和HSP90),本示蹤病毒使用CD63作為生物標記,通過將CD63與熒光蛋白偶聯,帶熒光的膜蛋白會在表達至外泌體膜上,便于后續進行、觀察內化或其他實驗。慢病毒載體的構建原理就是將HIV21基因組中的順式作用元件(如包裝信號、長末端重復序列)和編碼反式作用蛋白的序列進行分離。外泌體與各種疾病的相關性被檢測出,特別是血液中釋放的病細胞來源的外泌體。
人體內多種細胞在正常及病理狀態下均可分泌外泌體,包括干細胞、免疫細胞、內皮細胞、血小板及平滑肌細胞等。外泌體被包裹在堅硬的雙層膜中。雙層膜保護外泌體的內容物,使外泌體能夠在組織中長距離移動。干細胞外泌體因在上皮組織的增殖、遷移、再生、炎癥和瘢痕控制等方面的作用,有望成為“無細胞的細胞治理”工具。干細胞來源的外泌體可通過囊泡,將干細胞的精華部分——mRNA、miRNA、IncRNA及蛋白質等生物活性物質,打包運出干細胞體外。通過“細胞間高速公路”來“快遞”到人體各個組織內。外泌體被工程化改造后,具有靶向特定細胞類型或組織的功能。廣州外泌體iTRAQ
結果表明,PS親和法可以檢測到許多目前為止都無法檢測的外泌體蛋白質和RNA。廣州外泌體iTRAQ
在免疫系統中,淋巴細胞、樹突狀細胞、巨噬細胞、肥大細胞等均可以產生外泌體。研究表明免疫細胞來源的外泌體能夠明顯影響機體的免疫調節機制,包括調節抗原呈遞、免疫激huo、免疫監督等。不同免疫細胞來源的外泌體功能不同,以樹突狀細胞(該細胞具有免疫刺激能力,是目前能夠激huo初始T細胞的抗原遞呈細胞)來源的外泌體為例,其外泌體的免疫刺激作用取決于來源細胞的成熟狀態。成熟的樹突狀細胞外泌體內包含能夠直接激huoT細胞的MHCclassⅠ和MHCclassⅡ,共刺激分子如CD40、CD8、CD86和熱激蛋白,這些分子使樹突狀細胞來源的外泌體具有抗原呈遞、調節免疫響應的生物功能。廣州外泌體iTRAQ
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