對大多數細胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLPEIMAX轉染試劑都能獲得較高轉染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1.5~4μL體積線性PEIMAX轉染試劑進行優化。.PEIMAX(MW40,000)為Polysciences公司生產的化合物產品,每批產品出廠前都經過嚴格的檢測,保證每批產品都100%合格、穩定且品質高,但由于作為轉染試劑使用過程中有很多實驗室因素(配置方法,PH,水純度,稱量的準度,dnaRNA純度,細胞狀態,細胞品系…)造成溶解出現問題或者轉染效率出現差異,所以廠家只受理該產品純度,分子量及重量缺失破損等相關投訴,針對極個別客戶溶解問題和轉染效率問題我們能友善解決。更多關于PEI轉染試劑相關產品問題,歡迎咨詢上海曼博生物!25K和40K的PEI轉染試劑有哪些區別?血清兼容PEI轉染試劑
注意事項質粒質量:請務必使用高質量轉染級無內質粒(推薦使用QIAGEN或者MN公司去內質粒提取試劑盒)。通過260nm光吸收測定DNA濃度,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應該在1.8~2.0的范圍之內)。如有可能,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質粒的完整性。細胞條件:使用適當保存和經常傳代的健康細胞。確保培養基沒有被細菌、或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞,請在轉染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養細胞。近期還有PEIfree申請活動,歡迎咨詢上海曼博生物!血清兼容PEI轉染試劑Polysciences轉染試劑怎么樣?
線性PEI轉染試劑是一種陽離子聚合物,分子量25000,它能與核酸形成復合物,并使該復合物進入哺乳動物細胞。線性PEI轉染試劑廣適用于常見細胞系,如HEK-293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等。該試劑即使在有血清存在的情況下,它仍然能的將核酸導入細胞。78bio公司提供的線性PEI轉染試劑具有如下優點:優越的轉染效率,重組蛋白的高表達水平,與含血清的培養基相兼容,低細胞毒性,易于操作?質量控制每批次線性PEI轉染試劑均經過轉染測試。將eGFP表達質粒(GeneCopoeiaCat.No.EX-EGFP-Lv01)用EndoFectinTM-Plus轉染試劑轉入亞融合狀態的HEK-293細胞,轉染16h后,超過95%的細胞表達eGFP。
方法:1.細胞分盤:通過胰酶消化收集細胞,用適當的完全培養基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養皿上(根據實驗需要選擇培養皿,使細胞貼壁后所占總面積達到培養皿面積的70-90%)。根據細胞貼壁情況于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當細胞貼壁完全后即可開始轉染。轉染前換入2mL預熱的無血清培養基。2.制備PEI-DNA混合物:以60mm組織培養皿用420μL反應總體積為例。準備兩支1.5mL離心管,一管將質粒DNA(總量2-8μg為佳)加入240μLHBS中,混勻。另一管中則用HBS將100μM的PEI儲存液稀釋成10μM,充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中,充分混勻后室溫靜置20-30min。將這420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養基中,輕輕搖動平皿混勻,置于含5%~7%CO2的37℃溫箱孵育。注:每次用100μM的PEI儲存液前都需要先將其充分混勻,保證所取的濃度一致。3.培養6-10h后更換為37℃預熱的含有血清的培養基,繼續培養,16h左右可以觀測到報告基因的表達。更多關于PEI轉染試劑相關產品問題,歡迎咨詢上海曼博生物!PEI轉染試劑不含動物源成分。
穩定轉染方法1.接種細胞:轉染前,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養基稀釋適量DNA。用同樣的培養基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養板/培養皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養基,替換成無血清培養基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養基。更多關于PEI轉染試劑相關產品問題,歡迎咨詢上海曼博生物!如何辨別假的PEI轉染試劑?血清兼容PEI轉染試劑
PEI轉染試劑是不含動物源成分的。血清兼容PEI轉染試劑
Polysciences是一家化學品制造公司,產品廣泛應用于各個科研領域。公司成立于1961年,起初為電子顯微鏡提供納米級樣本制備方案,幫助科學家揭示未知領域。隨后,開拓了在病理(組織研究)應用產品,使組織除了石蠟包埋外,還能夠包埋在塑料塊中;開發染料和染色劑,以實現更好的樣品觀測方式。與government合作,開發了用于診斷試劑盒應的聚合物微球。與美國國家cancer中心合作,開發天然產物分離和純化產品,并用于紫杉醇的初步臨床試驗。繼而開發出超順磁珠,用于DNA、蛋白質和肽的研究。Polysciences的高純度單體和聚合物產品在醫療器械中有許多應用,并不斷開發和增強其性能。近期業務擴展到電子產品,Polysciences的精密微粒子產品拓展了納米技術應用中測量精度。公司秉承為應用而研發,目前已擁有超過3000種產品。PolysciencesInc.致力于提供先進的技術、制造能力和技術支持,幫助客戶實現他們的目標。上海曼博生物是Polysciences官方授權du jia代理商,更多關于轉染試劑相關問題,歡迎咨詢上海曼博生物!
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