目前市面上開發的外泌體提取試劑盒,是根據外泌體表面由類似于細胞膜的脂質雙分子層具有一定疏水性這一特性,用試劑捆綁水分子,從而可通過常規離心收集沉淀獲取外泌體。這種快速提取外泌體的方法雖簡便快捷、樣本需求少、對設備要求低,但與差速離心方法類似,其分離得到的沉淀包含其他細胞分泌的囊泡,且血清中含有大量血清蛋白分子,成分復雜,很可能摻雜一些未知的疏水大分子物質。Sabapatha等曾根據來源于胎盤的外泌體表面特異表達這一特性,使用耦合到磁珠的抗抗體,采用磁珠分選方法分離血漿中胎盤來源外泌體。此法可以提取的胎盤外泌體量少,不適用于大規模提取制備,且免疫磁珠價格昂貴,不利于提取技術的普及。外泌體中含有豐富的蛋白質和遺傳物質DNA以及RNA等。遼寧外泌體融合實驗
在免疫系統中,淋巴細胞、樹突狀細胞、巨噬細胞、肥大細胞等均可以產生外泌體。研究表明免疫細胞來源的外泌體能夠明顯影響機體的免疫調節機制,包括調節抗原呈遞、免疫激huo、免疫監督等。不同免疫細胞來源的外泌體功能不同,以樹突狀細胞(該細胞具有免疫刺激能力,是目前能夠激huo初始T細胞的抗原遞呈細胞)來源的外泌體為例,其外泌體的免疫刺激作用取決于來源細胞的成熟狀態。成熟的樹突狀細胞外泌體內包含能夠直接激huoT細胞的MHCclassⅠ和MHCclassⅡ,共刺激分子如CD40、CD8、CD86和熱激蛋白,這些分子使樹突狀細胞來源的外泌體具有抗原呈遞、調節免疫響應的生物功能。遼寧外泌體融合實驗外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結合,從而活躍細胞內的信號通路。
瘤釋放的外泌體可以通過削弱免疫效應細胞的反應和激發免疫抑制細胞的擴增,來營造一個免疫抑制的環境。瘤釋放的外泌體可以替代瘤細胞接受免疫系統的攻擊,從而幫助瘤細胞逃過免疫系統的識別。瘤釋放的外泌體可以引發炎癥,利用基質浸潤細胞的反應營造出利于瘤生長的微環境。研究表明,在過去短短的5年里,對外泌體的研究已經取得了比較好的的進展。如今,收集并分析瘤釋放的外泌體已經成為液體活檢的一個重要研發方向。靶向瘤釋放外泌體的治理策略將對改善病癥患者的命運發揮出舉足輕重的影響。
前列腺ai患者尿液外泌體中的miR-574-3p、miR-141-5p和miR-21-5p的表達水平明顯上升,表明這些miRNAs可用于前列腺ai的早期篩查。膽管ai是惡性程度較高的消化系統中流,發展隱蔽且臨床癥狀及體征出現晚,故給早期診斷帶來困難。高通量小RNA測序篩查了來自膽管ai和膽囊ai患者外泌體中一系列差異表達的miRNA,小RNA長度在正常個體、膽管ai患者和膽囊ai患者之間的分布存在明顯差異,膽管ai患者的外泌體中miR-96-5p、miR-151a-5p、miR-191-5p、miR-4732-3p明顯升高,而膽囊ai患者的外泌體中miR-151a-5p略有升高,為膽管ai和膽囊ai提供了一套新的生物診斷標志物。在凝血過程中血小板會分泌大量的外泌體,有研究發現血清中有接近50%的外泌體來自額外的分泌。
在血液和大多數體液(如尿液、腦脊液、唾液、胸腹腔積液、羊水和乳汁等)中均可檢測到外泌體。血液外泌體的檢測通常采用EDTA抗凝血分離的血漿,miRNA等一些微小RNA則采用血清樣本。泌尿系統中存在大量的RNA水解酶可降解尿液中的裸miRNAs,但外泌體外膜則可幫助RNA免于被降解,因此研究尿液外泌體miRNAs更具有應用價值。相較于血清中相關miRNA的水平,腦脊液外泌體中的miR-21可作為膠質瘤診斷和預后的指標,特別對預測中流復發或轉移具有價值。唾液樣本在安靜狀態下主要來源于舌下腺和頜下腺,刺激狀態下則主要來源于腮腺。類風濕關節炎患者的滑膜成纖維細胞所釋放的外泌體。遼寧外泌體融合實驗
外泌體的異質性決定了外泌體藥物遞送系統要根據所傳遞治理物質的類型、目標組織的特點等進行針對性的調整。遼寧外泌體融合實驗
目前為止已鑒別了2500余種miRNAs分子。例如,血液外泌體miR-21的升高已被證實與胰腺ai、結直腸ai、肝ai、乳腺ai、卵巢ai及食管ai等多種中流相關,可能與其參與中流xue管生成有關,研究表明肺ai細胞釋放的外泌體miR-21會通過STAT3依賴機制誘導周圍支氣管細胞血管內皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)的產生,從而促進血管生成。在食管ai中,miR-21還可以反映中流的惡性程度,食管ai患者的miR-21水平與良性中流患者相比急劇上升,上升的miR-21水平也與中流的淋巴侵襲和轉移相關。在膀胱ai患者中,尿液中的miR-21和miR-4454會明顯上調。遼寧外泌體融合實驗
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