要使外泌體在臨床上得以更加廣fan的應用，仍然需要更加深入的研究:(1)外泌體的提純方式主要是超速離心，這種提純方式效率較低，耗費時間長并且相對昂貴，并不適宜在臨床上應用。(2)外泌體雖然具有一定的靶向性，但這種靶向性較弱，不足以解決中流的靶向zhiliao問題。通過在外泌體表面表達特異性肽的方法可以為上述問題的解決提供較為有效的途徑。(3)在外泌體的載藥fang式方面，現在常用的電穿孔法雖更具優勢，但往往會對外泌體或藥物的完整性產生影響，轉染外泌體法不能保證基因類藥物全部進入外泌體內而不是粘附在外泌體表面，存在著安全隱患。(4)外泌體作為細胞分泌物質，其本身可調性并不如脂質體以及聚合物基藥物載體。外泌體其純度與超離心法和PEG沉淀法提取外泌體做比較。廣州腹水外泌體

細胞攝取診療性外泌體：從樹突狀細胞、成纖維細胞和間充質細胞中分離出的診療性外泌體可對靶細胞產生特定的作用，包括新抗原呈遞、免疫調節和藥物有效載荷傳遞。診療性外泌體對靶細胞的影響可能是通過不同的進入或相互作用機制來控制的。完整的外泌體的進入可能包括受體介導的內吞作用、網格蛋白包被小凹、脂筏、吞噬作用、小凹和大胞飲作用。外泌體的內容物的進入或外泌體信號的誘導可能涉及配體受體誘導的細胞內信號或融合，從而將外泌體內容物沉積到細胞質中。廣州腹水外泌體有報導指出，外泌體內miRNA參與促進血管新生、抗癥性和促進膠原蛋白沉淀等一系列過程。

磁珠免疫法分離外泌體：將針對目的抗原的抗體通過生物素-鏈霉親和素連接到磁珠表面，然后將磁珠與樣品共孵育，使外泌體特異性結合到磁珠上形成磁珠-外泌體復合物，再用蒸餾水或者PBS沖洗，結尾用甘氨酸-Tris-HCl溶液洗脫獲得外泌體。該方法相對于ELISA的好處主要是，珠粒提供了更大的表面積來捕獲外泌體，從而提高了分離效率。此外，使用磁珠時，樣品起始體積沒有上限，而基于微孔板的ELISA分析的較大樣品體積為100μL，且ELISA洗脫雜質時容易造成孔間交叉污染。當將磁珠法與金標準外泌體分離方法進行比較時，磁珠法可分離出更純凈的外泌體，特異性高、速度更快，并且不需要昂貴的儀器。另外，與其他分離方法（如超速離心或超濾）相比，磁珠法不影響外泌體形態。但是采用磁珠法時，外泌體生物活性易受PH和鹽濃度影響。

利用蛋白質免疫印跡和酶聯免疫吸附分析技術可以對外泌體標志性蛋白質進行定性定量分析。其中蛋白免疫印跡是外泌體的經典表征手段之一，操作時往往需要細胞裂解液作為陰性對照。常用的外泌體標志性蛋白質包括四跨膜蛋白質CD63、CD81、CD9、中流易感基因101蛋白(TSG101)、水通道蛋白2(AQP2，尿液中)和凋亡誘導因子6相互作用蛋白(Alix)等，內參蛋白質可以是肌動蛋白(βActin)或甘油醛－3-磷酸脫氫酶，陰性對照蛋白可以是阻抑素(PHB，線粒體標志蛋白)或鈣聯結蛋白Calnexin。在酶聯免疫吸附析法中，外泌體裂解液通過固載有抗體的固相基質，隨后與檢測抗體共孵育。兩種方法均存在操作繁瑣、耗時長的問題，相比較而言，酶聯免疫吸附分析法比蛋白質免疫印跡法更加快速，適用于高通量分析。流式細胞技術是細胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法，其用于外泌體定量檢測的準確性也在不斷上升。

外泌體分離的主要挑戰之一是消除納米級污染物，包括干擾外泌體標志物解析的游離核酸和脂蛋白。超速離心是目前分離外泌體的主要技術。盡管如此，它仍難以符合臨床應用所需的標準，主要是由于該方法得到的外泌體純度不足，產量較低，完整性欠佳且分離純化操作耗時長。其他方法，例如基于聚乙二醇（PEG）的沉淀，磷脂酰絲氨酸親和捕獲，尺寸排阻色譜法和膜親和捕獲，近年來已經出現在特定的應用中，但是只適用于特定場景。近來，非對稱流場-流分離方法已被用于從細胞和瘤子培養基中高分辨率地分選EV亞群，但其通量受到繁瑣的樣品制備程序的影響。單一分析耗時的過程也限制了其普遍的應用。因此，目前亟需開發創新技術以提高外泌體分離純化的效率，純度，產量，速度和耐用性。基于超濾的技術提供了潛在的有前途的替代方法，但它們也有缺點。在切向流過濾中，使進料流平行于多孔膜流動，以避免堵塞。然而，盡管已實現使用切向流過濾從大量條件細胞培養基中濃縮外泌體，但受制于其一次性模塊的成本高，高剪切應力，難以處理小體積樣品等因素而難以應用于臨床分析。多種細胞在正常及病理狀態下均可分泌外泌體。廣州腹水外泌體

神經細胞來源的外泌體含有與神經退行性疾病相關的分子。廣州腹水外泌體

外泌體能攜帶多種生物活性分子循環于血液／體液中并介導長距離的細胞間通訊，中流來源外泌體富含的蛋白質、核苷酸、脂質等分子能夠反映其來源細胞的生理及病理狀態，外泌體特殊的脂質雙分子層結構能保護其內RNA等分子免于降解，因此，檢測中流外泌體成為液體活檢一個明顯優勢。臨床試驗研究表明，外泌體在多種疾病的早期診斷、療效和預后監測等方面都具備較好的應用價值，正逐漸成為臨床診療中新的、理想的生物標志物和可能的靶向藥物載體。隨著技術的進步，組學時代的到來，大規模蛋白質組學已經被聯合應用于篩選和揭示多種ai癥細胞外囊泡的標志物。廣州腹水外泌體

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