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來源: 發(fā)布時(shí)間:2024年11月19日

外泌體中包含mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA等多種RNA分子,不同類型細(xì)胞所分泌的外泌體包含的RNA分子不同,這些RNA分子以外泌體為載體進(jìn)入靶細(xì)胞后,會(huì)通過不同的機(jī)制對(duì)靶細(xì)胞產(chǎn)生影響。通過高通量測序技術(shù)分析外泌體RNA分子差異,是對(duì)外泌體RNA功能研究的有效手段。英瀚斯生物在提取高純度外泌體總RNA分子基礎(chǔ)上,為外泌體研究提供專業(yè)高通量測序服務(wù),采用全新文庫構(gòu)建技術(shù),可獲得mRNA、lncRNA、circRNA及miRNA等豐富信息,***提升外泌體研究深度及廣度。外泌體提取鑒定分離實(shí)驗(yàn)平臺(tái),認(rèn)準(zhǔn)南京英瀚斯。山西外泌體價(jià)格

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外泌體是包含了復(fù)雜RNA展的總外泌體分離試劑從細(xì)胞培養(yǎng)基或任何體液中即刻分離完整的外泌體。這些試劑及其隨附的方案是多種試驗(yàn)的理想選擇,包括處理少量樣本和處理多個(gè)樣本。從細(xì)胞培養(yǎng)物中富集的總外泌體(使用“總外泌體分離”試劑或超速離心)可以通過免疫磁珠捕獲進(jìn)一步純化特定的亞群。使用基于Dynabeads的CD9、CD63、CD81或EpCam特異性試劑,或?qū)㈡溍褂H和素試劑與您選擇的生物素化抗體結(jié)合,以基于表面抗原,純化所有群體。天津值得信賴的外泌體哪家好外泌體檢測服務(wù),一站式生物外泌體檢測服務(wù)平臺(tái)。

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外泌體的產(chǎn)生過程為:細(xì)胞膜內(nèi)陷,形成內(nèi)體(endosome),再形成多泡體(multivesicularbodies,MVB),比較后分泌到胞外成為外泌體。外泌體中攜帶有母細(xì)胞的多種蛋白質(zhì)、脂類、DNA和RNA等重要信息。外泌體比較早見于1981年,EGTrams等在體外培養(yǎng)的綿羊紅細(xì)胞上清液中發(fā)現(xiàn)了有膜結(jié)構(gòu)的小囊泡,并命名為exosome。對(duì)于外泌體的作用,當(dāng)時(shí)推測為細(xì)胞排泄廢物的一種方式。1996年GRaposo等發(fā)現(xiàn)類似于B淋巴細(xì)胞的免疫細(xì)胞也會(huì)分泌抗原呈遞外泌體(antigenpresentingvesicle),所分泌的外泌體可以直接刺激效應(yīng)CD4+細(xì)胞的抗**反應(yīng)。2007年HValadi等進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)細(xì)胞之間可以通過外泌體中RNA交換遺傳物質(zhì)。隨著有關(guān)外泌體研究越來越多,研究者發(fā)現(xiàn)它普遍參與了機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原呈遞、細(xì)胞分化、**生長于侵襲等各種生物過程中。

外泌體的生成,微泡是由質(zhì)膜的出芽形成的,膜雙層通過磷脂的不對(duì)稱分布來維持脂質(zhì)的“多面性”。外層富含磷脂酰膽堿和鞘磷脂,而內(nèi)層主要由磷脂酰絲氨酸和磷脂酰乙醇胺形成。然而,胞質(zhì)Ca2+的內(nèi)流可以破壞這種不對(duì)稱性,導(dǎo)致磷脂跨膜雙層的重新分配,促進(jìn)膜起泡。依賴Ca2+的蛋白水解同時(shí)降解膜相關(guān)的細(xì)胞骨架,促進(jìn)出芽過程。在外泌體形成過程中,首先,MVE(多囊體)向內(nèi)芽形成小泡,內(nèi)含來自細(xì)胞質(zhì)的貨物(蛋白質(zhì)、mRNA和miRNAs)。然后,MVE要么與細(xì)胞膜融合釋放外泌體(內(nèi)囊泡),要么與溶酶體融合降解MVE含量。到達(dá)目的地后,外泌體通過內(nèi)吞途徑或與靶細(xì)胞膜融合,將其內(nèi)容物釋放到細(xì)胞質(zhì)中。細(xì)胞的膜的囊泡也可以直接從細(xì)胞膜上萌發(fā),攜帶活性蛋白、RNA和其他化合物。外泌體提取,超離法是比較常用的外泌體純化手段。

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外泌體鑒定分為三個(gè)層面:透射電鏡(transmission electron microscope,TEM)、Nanosight粒徑、蛋白標(biāo)志物。透射電鏡分辨率為0.1~0.2nm,適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察,可觀測樣本中是否存在外泌體樣結(jié)構(gòu)(通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形),同時(shí)可測量外泌體大小。外泌體表面存在特異性標(biāo)志物分子,如CD9、CD81、CD63等。以琳生物可以提供Western blot和流式細(xì)胞術(shù)的鑒定結(jié)果。外泌體(Exosome)參與細(xì)胞之間的交流,物質(zhì)的運(yùn)輸以及正常生理過程的維持、還與許多疾病息息相關(guān)。南京外泌體檢測服務(wù),優(yōu)先南京英瀚斯。山西外泌體價(jià)格

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外泌分離后可以做蛋白,也可以做RNA(microRNA和LncRNA),36%的研究人員通過Westernblot或其他方法來鑒定蛋白,29%的人員利用qPCR對(duì)microRNA表達(dá)譜進(jìn)行分析,9%利用芯片進(jìn)行microRNA表達(dá)譜分析。同時(shí),新一代測序的用戶也不少,13%的人員利用NGS開展microRNA/小RNA研究,9% 開展mRNA研究。此外,目前的大部分工作還是停留在科研階段,后續(xù)的生物標(biāo)志物開發(fā)和驗(yàn)證不多,而診斷和療法的開發(fā)就更少。Razvi認(rèn)為,exosome的定性和定量研究是個(gè)快速發(fā)展的市場。同時(shí),循環(huán)生物標(biāo)志物的市場也存在著機(jī)遇和挑戰(zhàn)。不過,無創(chuàng)產(chǎn)前檢測技術(shù)的成功讓人們相信,循環(huán)生物標(biāo)志物有望在**及其他疾病的診斷上發(fā)揮作用。山西外泌體價(jià)格

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