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PEI轉(zhuǎn)染試劑說明書

來源: 發(fā)布時間:2024年10月11日

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注意事項質(zhì)粒質(zhì)量:請務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級無內(nèi)質(zhì)粒(推薦使用QIAGEN或者M(jìn)N公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒)。通過260nm光吸收測定DNA濃度,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi))。如有可能,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。細(xì)胞條件:使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞。確保培養(yǎng)基沒有被細(xì)菌、或支原體污染。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞,請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細(xì)胞。近期還有PEIfree申請活動,歡迎咨詢上海曼博生物!關(guān)注曼博生物公眾號:Mine-bio,私信回復(fù)關(guān)鍵詞:PEI申請,即可參加試用裝申請活動。PEI轉(zhuǎn)染試劑用PEI轉(zhuǎn)染時,一般和DNA的比例是?

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細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗是生物醫(yī)學(xué)實驗室中常規(guī)的研究手段,目的是把外源基因、蛋白或者小分子導(dǎo)入到靶細(xì)胞內(nèi)。目前主要有三種主流方法:生物轉(zhuǎn)染,物理轉(zhuǎn)染和化學(xué)轉(zhuǎn)染。其中生物轉(zhuǎn)染主要是利用病毒等微生物作為基因?qū)胼d體,以慢病毒、腺病毒和腺相關(guān)病毒等常見,其侵染效率可以達(dá)到90%以上,但常因安全性等問題,很多實驗室對其敬而遠(yuǎn)之。物理轉(zhuǎn)染主要包括顯微注射、電穿孔和基因,無論哪一種都需要特定的設(shè)備,且一分錢一分貨,性能好的價格也都相對較高。如想申請試用裝,請關(guān)注公眾號:Mine-bio,回復(fù)“申請PEI”,即可參加!

1.對于某些類型的細(xì)胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細(xì)胞,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當(dāng)降低鋪板密度,以確保轉(zhuǎn)染時細(xì)胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細(xì)胞,可適當(dāng)降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞,但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達(dá)到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。4.對大多數(shù)細(xì)胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化。更多產(chǎn)品信息,歡迎咨詢上海曼博生物!美國Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑怎么樣?

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PEI在于可以應(yīng)用于體內(nèi)試驗。當(dāng)初試驗經(jīng)費(fèi)很有限,被逼無奈只能放棄脂質(zhì)體2000,選擇PEI,以至于相當(dāng)長的時間內(nèi),轉(zhuǎn)染試驗都不順利。下面是幾點(diǎn)關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染的注意要點(diǎn):1.PEI的使用量可以參照脂質(zhì)體2000的說明書,所用質(zhì)粒盡量去內(nèi)2.轉(zhuǎn)染時,一定要把PEI+DMEM加入到質(zhì)粒+DMEM中,順序不可錯,輕微混勻,靜止20min3.轉(zhuǎn)染后4小時,一定要換液!換含有FBS的完全培養(yǎng)液!因為PEI對細(xì)胞毒性太大4.如果后續(xù)試驗涉及到穩(wěn)定篩選,建議把血清濃度適當(dāng)提高。PS:事實證明,PEI是可行的,已經(jīng)做出穩(wěn)定細(xì)胞系了。Polysciences轉(zhuǎn)染與遞送相關(guān)產(chǎn)品已正式移交KyforaBio,相關(guān)產(chǎn)品標(biāo)簽將變更為KyforaBiobyPolysciences,后續(xù)購買請認(rèn)準(zhǔn)備新品牌。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)的信息,可咨詢上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司!PEI轉(zhuǎn)染試劑說明書

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