血清中的miR-122和miR-145非常不穩(wěn)定,將血清在4°C短期保存期間即發(fā)生降解,這可能是由外泌體的異質(zhì)性所導(dǎo)致的。–80°C保存被公認(rèn)是保存各種生物標(biāo)本如尿、牛奶、血液和支氣管肺泡灌洗液適宜的保存環(huán)境,雖然這樣保存血漿可能產(chǎn)生含有大量“污染物”的外泌體。4°C保存雖然容易導(dǎo)致外泌體中蛋白和核酸的損失,但卻能夠避免凍融過程造成的囊泡破壞。外泌體雖然建議保存于-80°C環(huán)境下,但在處理或運輸過程中有時很難維持這種低溫條件。CHAROENVIRIYAKUL等提出一種凍干法以保存外泌體,在冷凍過程中使用海藻糖作為保護(hù)劑,海藻糖可以提供生物保護(hù)作用,如穩(wěn)定蛋白質(zhì)、細(xì)胞膜和脂質(zhì)體;減少冷凍過程中冰的形成;防止蛋白質(zhì)以及外泌體的聚集;減少分離和保存過程中細(xì)胞外囊泡的損失等。在從體液中提取外泌體后，體液可長期穩(wěn)定保存。外泌體的研究進(jìn)展

外泌體在各種疾病的診斷和治理中的應(yīng)用研究火熱。外泌體的復(fù)雜性，為疾病檢測和監(jiān)測提供了一個多指標(biāo)的診斷窗口。此外，能夠向病變細(xì)胞輸送功能性物質(zhì)的特性使外泌體有潛力作為基因和藥物遞送的載體。有研究總結(jié)了從外泌體中篩選的生物標(biāo)志物，可用于疾病的診斷、預(yù)后及治理。外泌體在生物液體中寬泛分布，包括血液、尿液、唾液、胸腹水、腦脊液、膽汁、乳汁以及淚液等，其復(fù)雜的內(nèi)容物被認(rèn)為是疾病診斷的無創(chuàng)或微創(chuàng)生物標(biāo)志物，具有檢測包括病癥在內(nèi)的許多病理狀況的潛力，可以用于對心血管疾病和病癥等多種疾病的診斷和監(jiān)測。外泌體的研究進(jìn)展利用外泌體將siRNA和抗藥劑等運輸?shù)侥繕?biāo)細(xì)胞中。

在過去十年中，細(xì)胞外囊泡已經(jīng)成為細(xì)胞間通訊的重要介質(zhì)，參與原核生物和高等真核生物細(xì)胞之間的生物信號傳遞，以調(diào)節(jié)不同范圍的生物過程。此外，細(xì)胞外囊泡的病理生理作用開始在包括癥狀、傳播性疾病和神經(jīng)變性疾病在內(nèi)的疾病中得到認(rèn)識，突出了醫(yī)治干預(yù)的潛在新靶點。此外，未修飾和工程化的細(xì)胞外囊泡可能在大分子藥物遞送中具有應(yīng)用。該綜述回顧近在理解細(xì)胞外膜泡生物學(xué)和細(xì)胞外囊泡在疾病中的作用方面的進(jìn)展，討論新出現(xiàn)的醫(yī)治機(jī)會并考慮相關(guān)的挑戰(zhàn)。

外泌體特指直徑在30-150nm的囊泡，其主要來源于細(xì)胞內(nèi)多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。外泌體膜上富含參與外泌體運輸?shù)乃目缒さ鞍准易澹–D63,CD81和CD9）、熱休克蛋白家族（HSP60,HSP70和HSP90），本示蹤病毒使用CD63作為生物標(biāo)記，通過將CD63與熒光蛋白偶聯(lián)，帶熒光的膜蛋白會在表達(dá)至外泌體膜上，便于后續(xù)進(jìn)行、觀察內(nèi)化或其他實驗。慢病毒載體的構(gòu)建原理就是將HIV21基因組中的順式作用元件(如包裝信號、長末端重復(fù)序列)和編碼反式作用蛋白的序列進(jìn)行分離。超速離心是從生物體液或細(xì)胞上清分離外泌體的金標(biāo)準(zhǔn)方法。

外泌體是新型治理劑，惡性瘤細(xì)胞往往能夠通過分泌大量外泌體抑制宿主固有免疫。對外泌體的質(zhì)譜研究發(fā)現(xiàn)，惡性瘤細(xì)胞的外泌體含有大量活化型的表皮生長因子受體（epidermalgrowthfactorreceptor，EGFR），可以抑制宿主細(xì)胞α型干擾素(IFN-α)的產(chǎn)生。這就解釋了為什么部分瘤患者固有免疫低下，也為晚期病癥患者的治理提供一個新的策略和理論依據(jù)。除了瘤，外泌體在其他疾病如心血管疾病等的診斷和治理的相關(guān)臨床試驗也在世界范圍內(nèi)開展中。外泌體被工程化改造后，具有靶向特定細(xì)胞類型或組織的功能。外泌體的研究進(jìn)展

從癥狀患者樹突狀細(xì)胞釋放的外泌體中，含有各種癥狀細(xì)胞來源的蛋白質(zhì)。外泌體的研究進(jìn)展

結(jié)果表明，PS親和法可以檢測到許多目前為止都無法檢測的外泌體蛋白質(zhì)和RNA。應(yīng)用Tim4的外泌體強(qiáng)結(jié)合能力，可用ELISA或FACS高靈敏度定性檢測、定量分析外泌體。以前無法用超速離心法提取的微囊泡，也通過運用PS親和法實現(xiàn)高純度提取。本指導(dǎo)書中對該技術(shù)進(jìn)行詳細(xì)說明，這項技術(shù)的有用性今后將受到世界各方評價，有望在外泌體和微囊泡生理功能的分析研究上起重大貢獻(xiàn)。外泌體的檢測和提取還遇到一個困難即：對各種外泌體的分類。研究人員尚未統(tǒng)一定義以何種方法提取的細(xì)胞外囊泡可以稱之為外泌體，給實驗數(shù)據(jù)的分析和重復(fù)性確認(rèn)帶來困難。近年，隨著國際細(xì)胞外囊泡協(xié)會的成立、世界性研究者研討會的舉辦，提案MISEV指南作為國際標(biāo)準(zhǔn)，計劃或已經(jīng)開始進(jìn)行EV研究的科學(xué)家請務(wù)必閱讀這些方針。外泌體的研究進(jìn)展