為了解決外泌體實驗遇到的上述的各種問題,Wako研發出MagCapture?外泌體提取試劑盒PS（MagCapture?ExosomeIsolationKitPS）提取高純度細胞外囊泡。外泌體膜含有分泌細胞源的蛋白和脂質，眾所周知磷脂酰絲氨酸（PS）在活細胞通過翻轉酶作用導向細胞膜內側，暴露在外泌體膜外側3）。另外，T-cellimmunoglobulindomainandmucindomain-containingprotein4（Tim4通過巨噬細胞進行細胞凋亡的吞噬受體）蛋白通過細胞外域IgV域與含有鈣離子的PS結合4）。基于上述知識，我們利用Tim4固化磁珠，在鈣離子存在下捕捉培養上清和血清等樣品中的外泌體，再添加螯合劑洗脫外泌體，這種外泌體純化方法是和金澤大學醫學系免疫學華山教授共同開發，并取得了成功。5）這是迄今為止取代黃金標準超速離心法的新型外泌體純化方法。外泌體被包裹在堅硬的雙層膜中，雙層膜保護外泌體的內容物，使外泌體能夠在組織中長距離移動。血漿提取試劑盒原理

Pascucci等將包含有紫杉醇的間充質細胞來源外泌體與胰腺ai細胞共培養，發現裝載紫杉醇的間充質細胞外泌體具有很強的抗中流增殖效果。Tian等為降低免疫原性與毒性，采用小鼠未成熟樹突狀細胞所產生外泌體作為藥物載體。同時為實現外泌體運輸的靶向性，使細胞表達能夠識別乳腺ai細胞的外泌體膜蛋白Lamp2b(lysosomeasso[1]ciatedmembraneglycoprotein2b，溶酶體相關膜蛋白2)。并采用電穿孔的方法，在純化所得的小鼠未成熟樹突狀細胞外泌體中載入阿霉素。結果表明該外泌體能夠特異性的將阿霉素傳遞給中流組織，抑制中流生長且無明顯毒性。血漿提取試劑盒原理實際上，用PS親和法提取的人白血病細胞釋放的外泌體。

外泌體(Exosome)是由細胞分泌而來的微小囊泡，直徑約為30-200nm，形態也呈現出多樣性。microRNA(miRNA)是一種大小約21—23個堿基的單鏈小分子RNA，是由具有發夾結構的約70—90個堿基大小的單鏈RNA前體經過Dicer酶加工后生成，不同于siRNA（雙鏈）但是和siRNA密切相關。microRNA通過和靶基因mRNA堿基配對引導沉默復合體（RISC）降解mRNA或抑制mRNA的翻譯，從而在轉錄后水平調控蛋白表達。microRNA在物種進化中相當保守，在動物、植物等中發現的microRNA表達均有嚴格的組織特異性和時序性。microRNA在細胞生長和發育過程中起多種作用，包括調控發育、分化、凋亡和增殖等。

外泌體有很多潛在優勢，但是外泌體在藥物遞送中的應用研究才剛剛起步，尚有許多問題需解決：如何修飾外泌體的靶向性：缺氧瘤細胞來源的外泌體傾向于向缺氧瘤組織內募集；此外，還可通過在外泌體膜表面設計與靶細胞特異性結合的抗體、配體或受體來實現。如何提高藥物裝載效率：目前主要有①前裝載方法（首先將藥物加載到母細胞中，隨后外泌體形成并包裹藥物分泌到細胞外，常用的方法如轉染、共孵育等）；②后裝載方法（直接將藥物加載到外泌體中，例如孵育、電穿孔、超聲、擠出、凍融循環等）；③其他裝載方法（主要是通過生物工程修飾母細胞來實現）。如何實現外泌體的大量生產：目前大規模生產外泌體的方法主要是自發生產和非自發生產。目前，提取外泌體的方法主要有超速離心法、PEG沉淀法。

研究采用蔗糖密度梯度離心聯合2次PEG6000沉淀，極大地降低了外泌體的提取成本，且獲得的外泌體不僅表達外泌體公認的標志蛋白分子，同時也表達胎盤特異性蛋白分子，證明通過這種方法獲得的外泌體是胎盤來源外泌體。通過蔗糖密度梯度離心后得到的外泌體沉淀經蛋白質SDS-PAGE膠電泳，銀染后可見各蛋白分子條帶清晰可見，動態光散射分析粒徑，結果顯示獲得的外泌體顆粒粒徑大部分分布于28-91nm之間，與文獻報道外泌體顆粒大小相一致。胎盤外泌體經過PKH67熒光染料染色后，與細胞共孵育，熒光顯微鏡下觀察外泌體具備進入細胞的活性，進一步驗證了我們應用此種改良的分離方法可有效的獲得胎盤來源的外泌體。本研究通過蔗糖密度梯度離心聯合2次PEG6000沉淀成功分離得到母體血清中胎盤來源外泌體，并從蛋白標志分子、電鏡、粒徑及分布、進入細胞活性四方面對其進行了鑒定，為研究妊娠期間胎盤外泌體在正常妊娠及胎盤源性并發癥中的作用奠定了基礎。細胞分泌到細胞外環境中分別稱為外泌體和微泡的細胞外膜泡。血漿提取試劑盒原理

因外泌體內含mRNA、microRNA等核酸和蛋白質對相鄰細胞具有交換信息的功能。血漿提取試劑盒原理

獲得囊泡粒徑分布的兩種方法動態光散射(DLS)和納米顆粒跟蹤分析(NTA)都被廣fan應用于外泌體顆粒數目和粒徑分布的測量，但兩種方法也各有不足。動態光散射法中散射光強度依賴于顆粒質量(體積)，混合體系中大囊泡的存在(即使只有很少的量)將嚴重影響測量結果，因此動態光散射法更適用于單分散體系。而且動態光散射法所得的結果強烈依賴于所應用的數學算法。而采用納米顆粒跟蹤分析儀對不同粒徑范圍的囊泡進行檢測時，為了得到準確的濃度和粒徑信息，需要根據所要測量的顆粒粒徑范圍對儀器分別校準，操作繁瑣。受檢測靈敏度所限，納米顆粒跟蹤分析儀適用于粒徑范圍50nm～1μm的顆粒，粒徑小于50nm的外泌體無法檢測。除此之外，兩種方法都依賴光散射和粒子的布朗運動進行分析，難以區分合成的納米材料、大蛋白質聚合體和生物囊泡。血漿提取試劑盒原理