通過改變外泌體的溶解性或者分散性,可以將它們從體液或細胞培養(yǎng)液中沉淀出來。常見的方法是使用聚乙二醇或凝集素來沉淀樣品中的外泌體。聚乙二醇是一種水溶性非離子化合物,不含水的聚乙二醇可以通過“劫持”水分子增加疏水性蛋白和脂質(zhì)分子的相互結合力,從而迫使其脫離溶液,進而在低速離心條件下發(fā)生沉降。凝集素是一種具有高度特異性的碳水化合物結合蛋白,可通過與外泌體質(zhì)膜糖蛋白上的糖鏈結合來改變外泌體的溶解性。此外,還可使用魚精蛋白、醋酸鈉、有機溶劑沉淀等方法進行沉淀分離。利用外泌體將siRNA和抗藥劑等運輸?shù)侥繕思毎小１本┩饷隗wiTRAQ

circZKSCAN1在肝ai細胞中低表達且抑制肝ai細胞的增殖，ciRS-7則被認為是非小細胞肺ai、結腸ai和胃ai等中流的預后指標，其高表達與較高的臨床分期和較差的總體生存期相關。目前已發(fā)現(xiàn)組織、血液和外泌體中的circRNA分子表達失調(diào)，而多種circRNA的聯(lián)合檢測會提高外泌體標志物的敏感性和特異性，甚至可達到90％左右。外泌體可作為納米載體來介導細胞間的信息傳遞，發(fā)揮信息傳遞作用的方式主要有：在細胞間轉移受體，通過配體受體介導的方式作用于受體細胞，向受體細胞轉移功能蛋白，通過膜融合方式向受體細胞傳遞mRNA、miRNAs或轉錄因子等信息。這些方式為中流靶向zhiliao開辟了新的途徑。北京外泌體iTRAQ神經(jīng)細胞來源的外泌體含有與神經(jīng)退行性疾病相關的分子。

外泌體(Exosome)是由細胞分泌而來的微小囊泡，直徑約為30-200nm，形態(tài)也呈現(xiàn)出多樣性。長鏈非編碼RNA（longnon-codingRNA）是一類轉錄本長度超過200nt、不編碼蛋白的RNA。近年來的研究表明lncRNA能在標貫遺傳、轉錄及轉錄后水平上調(diào)控基因表達，參與了X染色體沉默、基因組印記以及染色質(zhì)修飾、轉錄jihuo、轉錄干擾、核內(nèi)運輸?shù)榷喾N重要的調(diào)控過程，與人類疾病的發(fā)生、發(fā)展和防治都有著密切聯(lián)系。lncRNA芯片對lncRNA進行功能研究也被更多的關注，通過設計不同的lncRNA探針，可以更加快速、高通量地篩選出疾病或特定生物學過程中差異表達的lncRNA和mRNA信息，找到lncRNA的靶基因位點深入分析調(diào)控機制。

獲得囊泡粒徑分布的兩種方法動態(tài)光散射(DLS)和納米顆粒跟蹤分析(NTA)都被廣fan應用于外泌體顆粒數(shù)目和粒徑分布的測量，但兩種方法也各有不足。動態(tài)光散射法中散射光強度依賴于顆粒質(zhì)量(體積)，混合體系中大囊泡的存在(即使只有很少的量)將嚴重影響測量結果，因此動態(tài)光散射法更適用于單分散體系。而且動態(tài)光散射法所得的結果強烈依賴于所應用的數(shù)學算法。而采用納米顆粒跟蹤分析儀對不同粒徑范圍的囊泡進行檢測時，為了得到準確的濃度和粒徑信息，需要根據(jù)所要測量的顆粒粒徑范圍對儀器分別校準，操作繁瑣。受檢測靈敏度所限，納米顆粒跟蹤分析儀適用于粒徑范圍50nm～1μm的顆粒，粒徑小于50nm的外泌體無法檢測。除此之外，兩種方法都依賴光散射和粒子的布朗運動進行分析，難以區(qū)分合成的納米材料、大蛋白質(zhì)聚合體和生物囊泡。外泌體中含有豐富的蛋白質(zhì)和遺傳物質(zhì)DNA以及RNA等。

雖然外泌體在疾病的診斷上有天然優(yōu)勢，但在臨床應用上仍有一些限制：外泌體的提取方法金標準仍然是差速離心法，但這種方法費時費力且提取效率較低，難以進行臨床推廣和應用；而商業(yè)化的試劑盒質(zhì)量參差不齊，往往導致提取物雜質(zhì)過多，且其售價較高。外泌體的定量是采用顆粒濃度定量，蛋白濃度定量，亦或是核酸濃度定量，目前仍存有爭議。由于傳統(tǒng)的內(nèi)參并不適用于外泌體，在實時熒光定量PCR檢測靶分子含量時內(nèi)參的選擇尚沒有統(tǒng)一的標準。外泌體分子標志物的研究還處于初級階段。目前外泌體研究的整個流程中成本都很高。外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型。北京外泌體iTRAQ

因外泌體內(nèi)含mRNA、microRNA等核酸和蛋白質(zhì)對相鄰細胞具有交換信息的功能。北京外泌體iTRAQ

與PC-3細胞相比，PC-3細胞外泌體中含有較高豐度的鞘糖脂、鞘磷脂、膽固醇和磷脂酰絲氨酸。外泌體常見的表面蛋白質(zhì)包括四跨膜蛋白(如CD63、CD9、CD81)、黏附蛋白(如L1CAM、LAMP2)、整合素和糖蛋白(如纖連蛋白)等，而外泌體囊泡內(nèi)蛋白質(zhì)則與來源細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)密切相關，包含例如熱休克蛋白(HSP70、HSP90)和細胞骨架蛋白(actin、tubulin、cofilin)等。除此之外，外泌體中還攜帶有來源細胞的miRNAs、mRNAs、non-codingRNAs、circularRNAs和DNA等遺傳物質(zhì)。外泌體的完整囊泡結構能夠保護其內(nèi)部生物分子不受體液中各種酶的影響從而保持其完整性和生物活性。北京外泌體iTRAQ