外泌體(Exosome)是由細胞分泌而來的微小囊泡,直徑約為30-200nm,形態也呈現出多樣性。microRNA(miRNA)是一種大小約21—23個堿基的單鏈小分子RNA,是由具有發夾結構的約70—90個堿基大小的單鏈RNA前體經過Dicer酶加工后生成,不同于siRNA(雙鏈)但是和siRNA密切相關。microRNA通過和靶基因mRNA堿基配對引導沉默復合體(RISC)降解mRNA或抑制mRNA的翻譯,從而在轉錄后水平調控蛋白表達。microRNA在物種進化中相當保守,在動物、植物等中發現的microRNA表達均有嚴格的組織特異性和時序性。microRNA在細胞生長和發育過程中起多種作用,包括調控發育、分化、凋亡和增殖等。活內的外泌體動態(哪個外泌體遷移至何處)也會成為今后需要努力研究的重要課題。杭州外泌體western blot
要使外泌體在臨床上得以更加廣fan的應用,仍然需要更加深入的研究:(1)外泌體的提純方式主要是超速離心,這種提純方式效率較低,耗費時間長并且相對昂貴,并不適宜在臨床上應用。(2)外泌體雖然具有一定的靶向性,但這種靶向性較弱,不足以解決中流的靶向zhiliao問題。通過在外泌體表面表達特異性肽的方法可以為上述問題的解決提供較為有效的途徑。(3)在外泌體的載藥fang式方面,現在常用的電穿孔法雖更具優勢,但往往會對外泌體或藥物的完整性產生影響,轉染外泌體法不能保證基因類藥物全部進入外泌體內而不是粘附在外泌體表面,存在著安全隱患。(4)外泌體作為細胞分泌物質,其本身可調性并不如脂質體以及聚合物基藥物載體。杭州外泌體western blot臨床前研究的證據表明干細胞釋放的外泌體可作為心肌修復的潛在無細胞治理劑。
外泌體研究可以指導診治肝損傷、酒精或非酒精性脂肪肝等其他肝臟疾病。藥物誘導肝損傷(DILI)大鼠模型中,尿外泌體中的蛋白含量減少,包括CD26、CD81和其他潛在的標志物蛋白。而另一項研究則發現DILI大鼠血清中分離到的外泌體含有更高水平的蛋白,如HSP70、HSP90等。MSCs來源的外泌體可以誘導肝細胞增殖相關基因表達,減弱CCL4誘導的肝損傷。而酒精刺激會促進外泌體的分泌,miRNAs水平也會升高,并促進細胞因子的分泌,喚醒單核細胞的分化。盡管已取得上述成果,我們對外泌體的研究尚不夠深入,外泌體在肝臟生理和病理中的重要作用及其臨床應用仍有待繼續探索。
建立記錄各論文實驗條件的數據庫也可作為規避混亂的方法之一。一方面,隨著EV研究倍受世界矚目,各國啟動了大型研究項目。美國啟動NIH戰略性大型項目(ExtracellularRNACommunication),國際厲害性學會——Gordon和KeystoneSymposia也從2016開始成立會議小組。受到歐洲藥物研究開發公司“創新藥物倡議組織(IMI)”的支持推進的CANCER-ID項目,也包含EV研究在內。2017年日本選定了EV研究為文部科學省研究開發戰略的目標之一,期待會加速今后的研究發展。無論如何,今后EV研究的根本就是必須有強有力的研究方法和技術,而PS親和法有望成為其中之一。外泌體作為膜和細胞溶質蛋白、脂質和RNA細胞之間傳遞的載體。
利用抗ai癥藥物進行中流zhiliao是抑制中流的一個重要方法,不過目前抗ai癥藥物的運載存在著種種挑戰,主要體現在以下幾點:(1)抗ai癥藥物的疏水性;(2)抗ai癥藥物的毒性以及非靶向性;(3)易被人體清chu,體內循環的半衰期很短等。采用外泌體運輸抗ai癥藥物,可以提高藥物體系的水溶性,降低藥物對人體的毒性以及避免被網狀內皮系統捕捉從而延長其循環時間。近期,兩種抗ai癥藥物———紫杉醇(PTX)和阿霉素(DOX)已經成功被載入外泌體中,并對其抗中流作用進行了研究。在抗原呈遞細胞中的外泌體發揮作用的報道后,人們對外泌體的興趣增強。杭州外泌體western blot
外泌體提純方法中,超速離心法和聚合物沉淀法(市售試劑盒)混入多種雜質。杭州外泌體western blot
尋找肝臟疾病的新型分子標志物一直是研究熱點,也是難點。不同肝臟疾病中,細胞分泌的外泌體所攜帶的核酸和蛋白組分之間存在差異。這些不同生理狀態下外泌體所攜帶的特異性蛋白分子、miRNA等,是潛在的分子診斷和預后標志物。肝細胞患者中,血清外泌體miR-21、-18a、-221、-222和miR-224明顯上升,miR-101、-106b、-122和miR-195明顯下降。而HCC患者肝移植復發后,血清外泌體miR-718水平明顯下降。除外泌體外,微泡也有可能作為新型標志物,研究發現HCV患病者中CD4+和CD8+T細胞來源的微泡含量上升;而肝臟干細胞分泌的微泡中多種miRNAs上調。杭州外泌體western blot