事實上,動物實驗表明:在小鼠急性心肌梗塞術后,注射來源于間充質(zhì)干細胞、心臟祖細胞、胚胎干細胞或心肌源性細胞的外泌體均可改善心臟功能,減輕心臟纖維化,刺激血管生成。例如,心源性細胞外泌體能通過特異性的巨噬細胞極化為急性心肌梗死提供心臟保護作用。心臟再灌注后,CDCexo的輸注降低了大鼠和豬心肌梗死模型的梗死面積,而且CDCexo會減少梗死組織內(nèi)CD68+巨噬細胞數(shù)量,并改變巨噬細胞的極化狀態(tài)。自體CD34+干細胞的移植可以改善缺血組織再灌注后的功能,并降低嚴重肢體缺血患者的截肢率。其作用機制在于:CD34+干細胞分泌的外泌體促進小鼠下肢缺血模型血管生成。雖然臨床前研究的證據(jù)表明干細胞釋放的外泌體可以作為心肌修復的潛在無細胞治理劑,但是,目前將外泌體完全用作心臟修復治理劑之前還是有很多重點問題需要解決。外泌體的遺傳分子與肝臟病理息息相關,在肝臟疾病診斷中可作為潛在的治理靶點或分子標志物。血細胞提取試劑盒分類
在運輸DOX的研究中,Wei等選擇了已經(jīng)在臨床上使用的未成熟的樹突細胞作為母代細胞,通過化學轉染使其分泌的外泌體表面含有Lamp2b,這種蛋白可以與αv整合蛋白特異性iRGD肽結合,使外泌體對DOX的運輸具有靶向性。將對iRGD肽靶向的外泌體和未經(jīng)靶向性處理的外泌體用DiR染料標記,并分別靜脈注射入移植了人乳腺ai細胞的小鼠體內(nèi),觀察到靶向的外泌體在注射30min后已經(jīng)出現(xiàn)在中流組織處,在注射2h后外泌體的含量高,而未經(jīng)靶向性處理的外泌體在注射后主要集中在肝臟,幾乎很少到達中流組織處,說明對iRGD肽靶向的外泌體具有很好的靶向性。血細胞提取試劑盒分類外泌體及活性蛋白能直接穿透皮膚間隙,快速直達基底層起效。
與正常細胞相比,中流細胞外泌體的分泌量增多,內(nèi)容物也存在明顯差異。由于囊泡結構的保護,中流細胞來源的外泌體內(nèi)攜帶有大量中流細胞來源的活性生物分子,其特點包括:(1)提供具有穩(wěn)定構象的蛋白質(zhì)分子;(2)保持蛋白質(zhì)的生物活性;(3)攜帶其中的生物分子經(jīng)體液運輸至遠端qi官;(4)膜融合的作用方式使得中流細胞來源的外泌體能夠與靶細胞之間進行更有效的信息交流。外泌體介導中流轉移:體外研究和體內(nèi)成像實驗表明惡性中流細胞產(chǎn)生的外泌體可以在全身水平上被同一中流或遠端中流中惡性程度較低的ai細胞攝入,其內(nèi)所包含的與轉移相關的mRNAs進入轉移性較低的細胞后,能夠增強其轉移能力。
外泌體由于包含的內(nèi)容物具有明顯的組織特異性,為其能成為瘤早期診斷的生物標志物提供了重要保障。但目前對于外泌體miRNA、LnkRNA等的檢測方法還不成熟,限制了外泌體用于疾病診斷中的應用?;谕饷隗w的診斷產(chǎn)品獲得FDA批準上市,很大程度的增加了研發(fā)企業(yè)的信心。外泌體的異質(zhì)性又決定了外泌體藥物遞送系統(tǒng)不能提供一個普適的遞藥策略,必須根據(jù)所傳遞治理物質(zhì)的類型、目標組織的特點等進行針對性的進行策略調(diào)整。良好的生物兼容性、穩(wěn)定性和內(nèi)在靶向性等使外泌體在藥物遞送方向大有潛力。免疫印跡法(WB)和Elisa檢測法作為被普遍應用的外泌體檢測的一般方法。
為了解決外泌體實驗遇到的上述的各種問題,Wako研發(fā)出MagCapture?外泌體提取試劑盒PS(MagCapture?ExosomeIsolationKitPS)提取高純度細胞外囊泡。外泌體膜含有分泌細胞源的蛋白和脂質(zhì),眾所周知磷脂酰絲氨酸(PS)在活細胞通過翻轉酶作用導向細胞膜內(nèi)側,暴露在外泌體膜外側3)。另外,T-cellimmunoglobulindomainandmucindomain-containingprotein4(Tim4通過巨噬細胞進行細胞凋亡的吞噬受體)蛋白通過細胞外域IgV域與含有鈣離子的PS結合4)?;谏鲜鲋R,我們利用Tim4固化磁珠,在鈣離子存在下捕捉培養(yǎng)上清和血清等樣品中的外泌體,再添加螯合劑洗脫外泌體,這種外泌體純化方法是和金澤大學醫(yī)學系免疫學華山教授共同開發(fā),并取得了成功。5)這是迄今為止取代黃金標準超速離心法的新型外泌體純化方法。外泌體可以作為生物標志物來對疾病進行檢測。血細胞提取試劑盒分類
有望在外泌體和微囊泡生理功能的分析研究上起重大貢獻。血細胞提取試劑盒分類
結果表明,PS親和法可以檢測到許多目前為止都無法檢測的外泌體蛋白質(zhì)和RNA。應用Tim4的外泌體強結合能力,可用ELISA或FACS高靈敏度定性檢測、定量分析外泌體。以前無法用超速離心法提取的微囊泡,也通過運用PS親和法實現(xiàn)高純度提取。本指導書中對該技術進行詳細說明,這項技術的有用性今后將受到世界各方評價,有望在外泌體和微囊泡生理功能的分析研究上起重大貢獻。外泌體的檢測和提取還遇到一個困難即:對各種外泌體的分類。研究人員尚未統(tǒng)一定義以何種方法提取的細胞外囊泡可以稱之為外泌體,給實驗數(shù)據(jù)的分析和重復性確認帶來困難。近年,隨著國際細胞外囊泡協(xié)會的成立、世界性研究者研討會的舉辦,提案MISEV指南作為國際標準,計劃或已經(jīng)開始進行EV研究的科學家請務必閱讀這些方針。血細胞提取試劑盒分類